Efek antiproliferatif adalah

Kekuasaan

Ketika infeksi terjadi di tubuh manusia, reaksi kekebalan berkembang dengan interaksi seluler yang kompleks. Regulator dari interaksi ini adalah molekul protein khusus - sitokin. Hingga saat ini, lebih dari 200 molekul sinyal yang berbeda telah dipelajari. Keunikan mereka adalah bahwa mereka sendiri tidak memiliki pengaruh terhadap antigen asing dan melayani secara eksklusif untuk mentransfer informasi dari satu sel ke sel lainnya. Tanpa partisipasi sitokin, pengembangan respon imun normal adalah mustahil. Salah satu sitokin kunci adalah interferon.

Ada tiga jenis interferon: interferon-alfa (INF-α), interferon-betta (INF-β), interferon-gamma (INF-γ). Semua interferon memiliki efek antivirus, imunomodulator, antitumor dan antiproliferatif. Selain sifat-sifat umum, interferon memiliki sejumlah perbedaan.

INF-α dan INF-β lebih mirip satu sama lain. Gen mereka terletak di kromosom 9. Untuk menghasilkan kedua sinyal menginduksi adalah virus. Mereka memiliki efek antiviral dan antitumor yang diucapkan, pada tingkat yang jauh lebih rendah, menunjukkan sifat imunomodulasi. Sel-sel utama yang memproduksi untuk INF-α adalah makrofag, untuk INF-β - sel epitel, fibroblas.

INF-γ memiliki efek imunomodulator yang jelas, bersama dengan interleukin-2 (IL-2) dan tumor necrosis factor (TNF atau TNF) adalah sitokin pro-inflamasi utama, merupakan penginduksi dari hubungan seluler imunitas. Sifat antiviral dan antitumor kurang menonjol dibandingkan INF-α dan INF-β. Gen INF-γ terletak di kromosom 12, sel-sel utama yang memproduksi adalah T-limfosit, sel pembunuh alami atau alami (NK-sel). Sinyal induktif untuk produksi dapat berupa antigen atau sitokin lainnya.

Efek antivirus interferon adalah untuk menekan sintesis RNA virus, menekan sintesis protein amplop virus. Mekanisme efek ini adalah aktivasi enzim intraseluler, seperti, misalnya, protein kinase atau sintetase adenilat. Protein kinase menghancurkan faktor inisiasi sintesis protein dengan messenger RNA, yang menghambat sintesis protein. Adenylate synthetase - menyebabkan sintesis zat yang menghancurkan RNA virus.

Efek imunomodulasi dari interferon adalah kemampuan untuk mengatur interaksi sel-sel yang terlibat dalam respon imun. Interferon akan melakukan fungsi ini dengan menyesuaikan sensitivitas sel terhadap sitokin dan ekspresi pada membran sel molekul kompleks histokompatibilitas utama tipe I (GCG1). Meningkatkan ekspresi GKG1 pada sel yang terinfeksi virus secara signifikan meningkatkan kemungkinan bahwa mereka akan dikenali oleh sel imunokompeten dan elelenii dari tubuh. INF-γ memiliki sifat imunomodulator yang paling menonjol.Menjadi produk limfosit tipe I, bersama dengan sitokin pro-inflamasi lainnya mengaktifkan makrofag, limfosit T-sitotoksik, sel pembunuh alami (NK-sel), menghambat aktivitas limfosit B, mengaktifkan prostaglandin dan sistem kortikosteroid. Semua faktor ini meningkatkan reaksi fagositik dan sitotoksik di area fokus inflamasi dan berkontribusi pada eliminasi efektif agen infeksi.

Efek antitumor dari interferon dikaitkan dengan kemampuan mereka untuk memperlambat atau menghambat pertumbuhan kultur sel dan mengaktifkan mekanisme antitumor dari sistem kekebalan tubuh. Sifat interferon ini telah ditemukan sejak lama dan digunakan secara luas untuk tujuan terapeutik. Semua efek antitumor interferon dibagi menjadi langsung dan tidak langsung. Langsung terkait dengan kemampuan untuk memiliki efek langsung pada sel-sel tumor, pertumbuhan dan diferensiasi mereka. Tidak langsung dikaitkan dengan peningkatan kemampuan sel imunokompeten untuk mendeteksi dan menghancurkan sel-sel atipikal tubuh.

Efek antitumor langsung dari interferon:

  • Inhibisi sintesis RNA.
  • Supresi sintesis protein.
  • Stimulasi sel yang tidak berdiferensiasi menjadi pematangan.
  • Meningkatnya ekspresi antigen membran sel tumor dan reseptor hormon.
  • Pelanggaran proses pembentukan kapal.
  • Netralisasi oncovirus.
  • Penindasan faktor pertumbuhan tumor.

Efek antitumor tidak langsung dari interferon:

  • Stimulasi aktivitas sel-sel sistem kekebalan tubuh (makrofag, sel NK, limfosit T-sitotoksik).
  • Peningkatan ekspresi pada sel-sel kelas histocompatibility kelas I.

Efek antiproliferatif dari interferon terletak pada kemampuan interferon untuk menunjukkan sifat sitostatik - untuk menghambat pertumbuhan sel dengan menekan sintesis RNA dan protein, serta menghambat faktor pertumbuhan yang merangsang proliferasi sel.

Glukokortikoid (Efek Antiproliferatif)

Efek antiproliferatif glukokortikoid dikaitkan dengan pembatasan paparan monosit terhadap fokus inflamasi dan penghambatan pembagian fibroblast baik oleh hormon itu sendiri dan penurunan efek stimulasi pada mereka histamin, serotonin, dan kinin, pembentukan yang berkurang oleh steroid ini.

Selain itu, glukokortikoid menekan sintesis mukopolisakarida dan dengan demikian membatasi pengikatan protein air dan plasma oleh jaringan, yang, bersama dengan eksudat, terikat pada fokus peradangan rematik. Akibatnya, pembengkakan dan, yang paling penting, perkembangan fase fibrinoid peradangan rematik, dan kemudian hyalinosis, berkurang.

Akibatnya, pelanggaran dalam struktur katup jantung, miokardium, pembuluh darah, dll. Dicegah atau dikurangi secara signifikan.Efek yang paling baik berkembang ketika menggunakan glukokortikoid bersama dengan obat anti-inflamasi nonsteroid.

Glukokortikoid juga digunakan untuk mengkompensasi kekurangan mereka dalam tubuh, dan untuk dampak regulasi pada gangguan fungsi.

Dalam rangka untuk memperbaiki hormon glukokortikoid kurangnya bila digunakan sebagai insufisiensi primer adrenal (penyakit Addison, perdarahan di korteks adrenal pada sepsis, cedera lahir, hipoksia), ditandai insufisiensi dan gluco dan mineralokortikoid, dan pada insufisiensi adrenal sekunder (hipopituitarisme, sistem penghambatan hipotalamus - pituitari - korteks adrenal karena penggunaan glukokortikoid jangka panjang), ditandai dengan kekurangan glukokortikoid saja.

"Farmakologi Anak", I.V. Markova

Meresepkan kortikosteroid setiap hari dapat mencegah atau mengurangi penghambatan hipotalamus - hipofisis ––––––––––––––––– sistem kelenjar adrenal dan penekanan resistensi nonspesifik terhadap infeksi. J. Melby (1977) mencatat indikasi yang, pada kebanyakan pasien, glukokortikoid dapat diresepkan setiap hari, serta penyakit yang tidak mungkin terjadi. Anda dapat menggunakan glucocorticoids setiap hari untuk penyakit berikut: bronkus...

Ketika meresepkan kortikosteroid dalam kasus yang tidak memerlukan perawatan darurat, dianjurkan untuk mempertimbangkan ritme harian sekresi hormon endogen dari korteks adrenal. Pada awal pengobatan, sebagian besar (biasanya 2/3) dosis harus diresepkan di pagi hari, 7 hingga 8 jam, sisanya - di sore hari, 13 hingga 14 jam. Ketika membagi dosis harian menjadi tiga dosis, mereka diberikan pada 7, 10...

Mineralokortikoid alami - aldosteron - diproduksi oleh zona glomerulus korteks adrenal; Proses ini diatur oleh angiotensin II, yang terbentuk di bawah pengaruh renin. Deoxycorticosterone acetate (DOXA) dan DOX-trimethyl acetate digunakan sebagai obat. Indikasi untuk digunakan. Mineralokortikoid digunakan untuk toksikosis usus dalam kombinasi dengan terapi infus. Mereka juga digunakan dalam hipotensi akut yang terkait dengan hilangnya natrium dan air (tapi...

Indikasi untuk pemberian jangka panjang dosis tinggi glukokortikoid. Mereka digunakan selama beberapa minggu dan bahkan berbulan-bulan dalam pengobatan anemia hemolitik autoimun, purpura thrombocytopenic, beberapa nefritis, kolitis ulserativa, sarkoidosis, leukemia akut, penyakit Hodgkin umum, karditis non-rematik, kadang-kadang dengan asma bronkial berat. Dalam kebanyakan kasus, efek terapi di sini tergantung pada penindasan reaksi sitolisis, terutama dari genesis alergik....

Steroid anabolik: methandrostenolone (Dianabol, nerobol), methylandrostediol (methandriol), phenobolin (durabolin, nerobolil), retabolil - zat yang diperoleh dengan sintesis dari hormon seks pria (androgen). Androgen memiliki dua efek berbeda: androgenik (yaitu, merangsang perkembangan karakteristik seksual sekunder) dan anabolik. Steroid anabolik berbeda dari androgen dalam struktur, dan sifat androgeniknya berkurang tajam (100 kali atau lebih).

Obat-obatan antiproliferatif - Daftar obat-obatan dan obat-obatan medis

Deskripsi tindakan farmakologis

Tindakan antiproliferatif ditujukan untuk menekan proliferasi berlebihan berbagai sel. Mekanisme kerja berbeda dan tergantung pada obat spesifik dan jenis sel yang menjadi sasaran tindakan ini. Secara khusus, mekanisme tindakan ini dapat dikaitkan dengan penyediaan efek modulasi pada sintesis onkogen tertentu, yang mengarah ke normalisasi transformasi sel neoplastik dan penghambatan pertumbuhan tumor. Atau mekanisme aksi mungkin didasarkan pada penghambatan proliferasi fibroblast, dirangsang oleh faktor utama pertumbuhan fibroblast. Obat dengan efek antiproliferatif digunakan dalam pengobatan dan pencegahan berbagai penyakit onkologi, adenoma prostat, dan berbagai penyakit kulit kronis (misalnya, psoriasis).

Pencarian obat

Persiapan dengan aksi farmakologi "Antiproliferatif"

  • A
  • Avonex (Lyophilisate untuk persiapan solusi untuk suntikan)
  • Avonex (Solusi untuk pemberian intramuskular)
  • Adenostop (Berkonsentrasi untuk persiapan larutan oral)
  • Altevir (Solusi untuk injeksi)
  • Alfaferon (Solusi untuk injeksi)
  • Arava (tablet oral)
  • B
  • Beloderm (krim untuk penggunaan eksternal)
  • Beloderm (Salep untuk penggunaan eksternal)
  • R
  • Genferon (Rectal Suppositories)
  • Genferon Light (Semprot hidung)
  • D
  • Dilatrend (tablet oral)
  • L
  • Leflunomide (Zat Bubuk)
  • Leflunomide (tablet oral)
  • F
  • Permixon (Capsule)
  • R
  • Realdiron (Lyophilisate untuk persiapan solusi untuk administrasi subkutan)
  • Ronbetal (Solusi untuk administrasi subkutan)
  • T
  • Tadenan (Capsule)
  • Tykveol (Minyak untuk administrasi oral)
  • Tykveol (Supositoria Rektal)
  • Tykveol (Capsule)

Perhatian! Informasi yang disajikan dalam panduan pengobatan ini ditujukan untuk para profesional medis dan tidak boleh menjadi dasar untuk perawatan diri. Deskripsi obat diberikan untuk sosialisasi dan tidak dimaksudkan untuk pengangkatan pengobatan tanpa partisipasi dokter. Ada kontraindikasi. Pasien membutuhkan saran ahli!

Jika Anda tertarik dengan agen dan persiapan Antiproliferatif lainnya, deskripsi dan petunjuk penggunaan, sinonim dan analog, informasi tentang komposisi dan bentuk pelepasan, indikasi untuk digunakan dan efek samping, metode penggunaan, dosis dan kontraindikasi, catatan tentang obat anak-anak, bayi baru lahir dan wanita hamil, harga dan ulasan obat-obatan atau Anda memiliki pertanyaan dan saran lainnya - kirimkan surat kepada kami, kami pasti akan mencoba membantu Anda.

antiproliferatif

Tindakan antiproliferatif ditujukan untuk menekan proliferasi berlebihan berbagai sel.

Mekanisme kerja berbeda dan tergantung pada obat spesifik dan jenis sel yang menjadi sasaran tindakan ini. Secara khusus, mekanisme tindakan ini dapat dikaitkan dengan penyediaan efek modulasi pada sintesis onkogen tertentu, yang mengarah ke normalisasi transformasi sel neoplastik dan penghambatan pertumbuhan tumor. Atau mekanisme aksi mungkin didasarkan pada penghambatan proliferasi fibroblast, dirangsang oleh faktor utama pertumbuhan fibroblast.

Obat dengan efek antiproliferatif digunakan dalam pengobatan dan pencegahan berbagai penyakit onkologi, adenoma prostat, dan berbagai penyakit kulit kronis (misalnya, psoriasis).

Agen antiproliferatif

Penemuan ini berhubungan dengan industri farmasi, khususnya untuk sarana asal alam, dengan aktivitas antiproliferatif. Agen dengan aktivitas antiproliferatif, adalah ekstrak protein canis Toxocara, diperoleh dengan mengekstraksi homogenat cacing T. Canis fosfat-saline larutan buffer dengan pH 7,2 dalam rasio 1:10 untuk 36-48 jam pada 4 ° C, sentrifugasi. Alat di atas memiliki aktivitas antiproliferatif yang jelas. 1 hp f-ly, 1 tab., 2 ex.

Penemuan ini berhubungan dengan bidang kedokteran dan kedokteran hewan, khususnya untuk alat baru asal alam, yang memiliki efek antiproliferatif.

Obat modern memiliki gudang obat yang cukup luas untuk kemoterapi tumor. Sebagian besar agen kemoterapi diwakili oleh kelompok obat-obatan antineoplastik pengalkil, antimetabolit, antibiotik antitumor, obat hormon antitumor, imunomodulator dan beberapa lainnya dengan mekanisme kerja yang berbeda. Sebagian besar obat antikanker ini sangat beracun, dan oleh karena itu skema dan durasi kemoterapi dipilih dengan mempertimbangkan manifestasi efek samping, yang mempengaruhi efektivitas pengobatan secara umum.

Obat antitumor alami asal tumbuhan diketahui (Vinca roseal alkaloid (vinblastin, vincristine); alkaloid pohon yew (taxanes) (paclitaxel, docetaxel); )) dan asal bakteri (rubromisin dan lain-lain), yang memiliki penggunaan terbatas juga karena toksisitas yang tinggi dan spektrum terapi yang sempit (pengobatan beberapa jenis s tumor, sebaiknya dengan pertumbuhan eksofitik).

Akibatnya, ada kebutuhan akan obat antikanker baru yang sangat efektif yang berasal dari alam, yang akan memiliki spektrum tindakan yang luas dan akan kurang beracun.

Helminths - nama umum untuk cacing parasit yang hidup pada manusia, hewan dan tumbuhan lain yang menyebabkan infeksi cacing.

Cacing termasuk wakil cacing pita, atau cestoda, cacing, atau trematoda (kedua kelompok ini termasuk cacing pipih) dan cacing gelang, atau nematoda.

Yang terakhir termasuk toxocars (khususnya, Toxocara canis). T. canis adalah parasit nematoda di usus karnivora, seperti anjing; penyakit invasif yang dikenal sebagai toxocariasis.

Selama parasitisme, cacing memproduksi dan melepaskan berbagai produk metabolik. Produk sisa sekretorik-ekskretoris dari cacing adalah zat alami untuk organisme inang dalam proses fisiologisnya.

Telah diketahui bahwa patogen invasi dapat memiliki efek modulasi pada banyak penyakit dengan etiologi yang paling bervariasi, termasuk yang ganas (misalnya, Vasilev S. et al. (2015). Secara khusus, ada laporan bahwa infeksi dengan nematoda Trichinella spiralis ( reproduksi trichinosis) mengarah ke penindasan pertumbuhan sel-sel ganas dan meningkatkan kelangsungan hidup hewan setelah inokulasi sel-sel melanoma B-16 in vivo (Molinari JA, Ebersole JL, 1977; Pocock D., Meerovitch E., 1982; Kang YL et al., 2013 Juga tersedia data tentang produk metabolisme T. spira lis dengan efek penghambatan pada pertumbuhan dan kelangsungan hidup sel tumor in vitro (Vasilev S. et al., 2015; Wang X. L. et al., 2009; Wang X. L. et al., 2013).

Studi untuk menilai aktivitas antitumor T. canis atau produk metabolik dari helmints ini belum pernah dilakukan sebelumnya.

Tujuan dari penemuan ini adalah untuk memperoleh ekstrak protein dari jaringan T. canis, evaluasi efek antiproliferatif mereka pada model sel tumor berbagai garis dan memastikan kemungkinan penggunaannya di masa depan sebagai agen antitumor yang efektif.

Inti dari penemuan ini terletak pada kenyataan bahwa agen dengan aktivitas antiproliferatif adalah ekstrak protein cacing, khususnya ekstrak Toxocara canis. Perlu dicatat bahwa kondisi untuk memperoleh ekstrak dari homogenat cacing, termasuk T. canis, tergantung pada bahan biologis yang digunakan, dan fitur penting untuk memperoleh ekstrak protein adalah ekstraksi dengan buffer fosfat-salin dengan pH = 7,2.

Ekstrak memiliki efek antiproliferatif dan sitostatik pada model sel tumor manusia secara in vitro. Seperti disebutkan di atas, ekstrak toxocar belum pernah diuji pada model sel tumor manusia secara in vitro.

Karena asal-usul alami dari agen antiproliferatif yang diusulkan mungkin kurang beracun di hadapan efikasi antitumor tinggi dari spektrum tindakan yang luas.

Contoh kinerja spesifik

Contoh 1. Persiapan ekstrak protein T. canis.

Sebagai sarana, mungkin dengan aktivitas antiproliferatif, digunakan ekstrak protein dari T. canis matang, pra-dimurnikan dari senyawa dengan berat molekul rendah.

Dicuci secara menyeluruh dengan air suling, kemudian dengan larutan fisiologis, cacing dewasa yang dibekukan secara segar - Toxocara canis menjadi sasaran penggilingan gunting, homogenisasi dalam mortar porselen yang ditempatkan di piring dengan es. Dalam proses homogenisasi, biomaterial yang dihasilkan menjadi sasaran beberapa pembekuan dan pencairan (3-5 kali) dengan penggilingan serentak untuk menghancurkan struktur bahan mentah sepenuhnya untuk mendapatkan massa homogen yang homogen. Sebagai ekstraktan protein dari homogenat yang diperoleh dari T. canis, larutan buffer fosfat-garam pH 7,2 digunakan, yang disiapkan sesuai dengan resep (natrium klorida, 8,5 g; natrium fosfat disubstitusikan, 1,15 g; mono-fosfat asam kalium, 0, 2 g dalam 1 l air suling) dalam rasio 1:10. Ekstraksi dilakukan dalam kondisi didinginkan pada + 4 ° C selama 48 jam dengan pengadukan konstan pada pengaduk magnet. Setelah waktu ekstraksi, biomaterial yang dihasilkan disentrifugasi pada 15.000 rpm selama 20 menit dalam centrifuge didinginkan Optima TLX (bench-top centrifuge yang dikendalikan oleh mikroprosesor Becman Coulter Herneshal, S.A.). Ekstrak protein dari T. canis diperoleh setelah sentrifugasi dibebaskan dari protein berat molekul rendah dengan dialisis terhadap larutan buffer fosfat-garam yang diencerkan dengan air suling dalam rasio 1:10.

Ekstrak protein yang diperoleh disimpan pada -20 ° C. Dengan menggunakan elektroforesis gel poliakrilamida, ditentukan bahwa ekstrak protein dari T. canis mengandung lebih dari 20 fraksi protein dari berbagai mobilitas elektroforetik dan berat molekul.

Contoh 2. Evaluasi efek ekstrak protein T. canis pada kultur sel kanker payudara manusia (MCF-7) dan kolon manusia (Caco-2) tergantung pada konsentrasi ekstrak.

Tujuan dari percobaan ini adalah untuk menilai efek dari ekstrak protein T. canis pada proliferasi sel tumor manusia dari dua garis.

Bahan dan Metode

Sel target. Dua garis sel epitel digunakan dalam penelitian ini: MCF-7 (adenokarsinoma payudara manusia) dan Caco-2 (adenokarsinoma kolon manusia). Sel-sel, di luar percobaan, disimpan dalam nitrogen cair. Sebelum melakukan penelitian, ampul dengan sel dicairkan dan dibiakkan dengan metode standar dalam botol kultur (CORNING, Flask, 25 cm 2, USA) dalam media pertumbuhan DMEM GlutaMAX (Gibco) dengan penambahan FBS 10% dan antibiotik / antimycotic (Gibco, × 100) kondisi kelembaban tinggi2-inkubator (New Brunswick, Galaxy 170R) pada T = 37 ° C dalam atmosfer 5% CO2.

Ekstrak protein yang dipelajari. Ekstrak protein yang diteliti T. canis (untuk persiapan, lihat contoh 1) adalah ekstrak dalam salin fosfat-buffered, tidak steril. Konsentrasi protein dalam larutan stok adalah 10,9 mg / ml. Sebelum penelitian, larutan disimpan pada -70 ° C.

Sebelum operasi, tabung dengan ekstrak protein dicairkan pada suhu kamar. Dalam percobaan in vitro, ekstrak protein diuji pada konsentrasi protein berikut: 12,5, 25, 50, 100, 250, 500, 1 dan 2 mg / ml. Untuk persiapan pengenceran, media pertumbuhan DMEM GlutaMAX (DGIBCO) dengan 2% FBS dan antibiotik digunakan.

Sebelum percobaan, solusi yang bekerja dengan konsentrasi 2 mg / ml disiapkan, setelah sterilisasi melalui nozzle filter millipore (0,22 μ), pengenceran ekstrak T. canis disiapkan: 1, 500, 250, 100, 50, 25 dan 12,5 µg / ml menggunakan media pertumbuhan DMEM GlutaMAX (DGIBCO) dengan 2% FBS dan antibiotik.

Untuk percobaan, sel MCF-7 dan Caco-2 diinkubasi sesuai dengan prosedur standar untuk mendapatkan monolayer subkutan. Pada tahap pertumbuhan aktif, sel monolayer terdispersi dengan larutan trypsin / versaen, sel-sel yang dihasilkan disuspensi dalam medium pertumbuhan DMEM GlutaMAX (Gibco) dengan 10% FBS dan antibiotik konsentrasi standar. Suspensi sel yang baru disiapkan ditaburkan di piring 24-well (SARSTEDT, Jerman) pada 35x103 sel per sumur untuk sel MCF-7 dan pada 30x103 sel per sumur untuk sel Caco-2. Setelah itu, piring ditempatkan di CO2-inkubator selama 3 jam sampai sel-sel tergeletak. Kemudian, medium dengan sel yang tidak patuh dihapus dari sumur dan media pertumbuhan ditambahkan ke sumur eksperimental dengan konsentrasi uji substansi (dalam 4 pengulangan untuk setiap konsentrasi uji). Sebagai kontrol, empat sumur tersisa dengan sel yang dikultur dalam media pertumbuhan lengkap dengan 2% FBS tanpa zat uji. Volume akhir media pertumbuhan dalam kelompok kontrol dan eksperimen 500 μl per sumur.

Selama percobaan, pengamatan cahaya-optik harian sel dilakukan menggunakan mikroskop Olympus CK 40 terbalik (Jepang), menilai ada tidaknya perubahan morfologi sel di sumur eksperimental dibandingkan dengan kontrol. Respon proliferatif sel tumor terhadap aksi ekstrak yang diteliti T. canis dievaluasi oleh kepadatan dan viabilitas dari monolayer yang terbentuk setelah 96 jam inkubasi sel di hadapan ekstrak yang diteliti.

Viabilitas sel ditentukan dengan menggunakan prosedur penghitungan sel standar di ruang Goryaev dengan pewarnaan awal suspensi sel dengan larutan biru triptan. Untuk tujuan ini, monolayer terdispersi dengan larutan trypsin / verssen, sel-sel diresuspensi dalam medium pertumbuhan, dan suspensi sel yang dipersiapkan dicelup dengan 0,4% larutan Trypan Blue (SIGMA). Setelah itu, sel-sel dihitung di ruang Goryaev. Untuk melakukan ini, jumlah total sel dan jumlah sel yang bernoda (tidak dapat hidup) dihitung dalam setiap sumur.

% sel yang layak (Nbaiklah) dihitung dengan rumus

dimana nt - total (total) jumlah sel di dalam sumur;

Ntentang - jumlah sel yang bernoda (tidak bisa hidup) di dalam sumur.

Efek dari ekstrak T. canis yang diteliti pada aktivitas proliferasi sel tumor MCF-7 dan Caco-2 dievaluasi setelah 96 jam, membandingkan jumlah total sel dalam sumur eksperimental relatif terhadap kontrol.

Selama percobaan untuk menilai efek dari ekstrak T. canis yang diteliti dalam konsentrasi yang ditunjukkan pada kultur epitel sel tumor mammae manusia (MCF-7) dan kolon manusia (Caco-2), pertumbuhan harian dan morfologi koloni yang tumbuh dari sel secara visual dipantau. Setelah 24 dan 48 jam di semua sumur percobaan dengan sel MCF-7 dan Caco-2, kepadatan koloni sebanding dengan kontrol. Tidak ada perubahan morfologi yang ditemukan. Detritus benar-benar absen.

Setelah 72 jam, kelambatan pertumbuhan yang signifikan diamati pada sel MCF-7 dan Caco-2 pada konsentrasi 2 mg / ml. Telah dicatat bahwa dalam sumur eksperimental pada 2 mg / ml ukuran koloni lebih kecil dari pada kelompok kontrol; juga di bidang pandang, jumlah sel membelah mitosis telah terasa menurun, dan tidak ada perubahan morfologi yang dicatat. Dalam sumur MCF-7 dan Caco-2 sel pada 1 dan 500 μg / ml, sedikit kelambatan pertumbuhan diamati dibandingkan dengan kontrol. Dalam sumur eksperimental dengan konsentrasi 12,5, 25, 50 dan 250 μg / ml, tidak ada perbedaan yang ditemukan dibandingkan dengan kelompok kontrol K.

Setelah 96 jam kultivasi di MCF-7 dan Caco-2 sel pada konsentrasi 2, 1, dan 500 μg / ml, secara signifikan lebih sedikit koloni yang berproliferasi diamati di bidang pandang, dengan jumlah sel yang lebih sedikit, dibandingkan dengan kelompok kontrol. Perubahan morfologi tercatat pada sel MCF-7 hanya pada konsentrasi maksimum 2 mg / ml. Dalam kelompok eksperimen ini, koloni individu terlihat, di mana sel-sel tanpa kontur yang jelas dan diucapkan dengan hilangnya pola karakteristik diamati. Jumlah sel mitosis yang membelah di bidang pandang berkurang. Dalam hal ini, detritus di lingkungan tidak ada.

Setelah percobaan selesai, setelah 96 jam, sel-sel itu trypsinized, suspensi sel yang dihasilkan dicelup dengan larutan biru trypan 0,4%, dan jumlah sel dihitung dalam ruang Goryaev. Hasil penghitungan sel disajikan dalam tabel 1.

Dari data yang disajikan dalam tabel 1, berikut bahwa ekstrak T. canis yang diteliti tidak secara signifikan mempengaruhi jumlah sel Caco-2 yang layak setelah 96 jam inkubasi. Dengan demikian, pada konsentrasi 2, 1, dan 500 μg / ml, jumlah sel yang layak dari kolon manusia adalah 90,0, 88,5, dan 88%, yang sebanding dengan kelompok kontrol sel, dimana viabilitasnya adalah 96%. Pada saat yang sama, pada nilai konsentrasi yang sama, penurunan yang signifikan dalam jumlah total sel diamati dibandingkan dengan kelompok kontrol. Dengan demikian, jumlah total sel Caco-2 pada kelompok kontrol setelah 96 jam kultivasi adalah 116,7 × 10 3 sel / baik, dan pada 500, 1 dan 2 mg / ml adalah 72,0 × 10 3, 63,3 × 10 3 dan 65,9 × 10 3 sel / baik, masing-masing. Pada konsentrasi ekstrak dari 12,5 hingga 250 μg / ml, jumlah total sel sebanding dengan kelompok kontrol dan berkisar dari 94,0 × 10 3 hingga 106,0 × 10 3 sel / baik. Berdasarkan hal ini, dapat disimpulkan bahwa konsentrasi tinggi ekstrak T. canis dari 500 hingga 2 mg / ml menghambat aktivitas proliferasi sel tumor Caco-2.

Ketika membandingkan hasil yang diperoleh (Tabel 1) pada efek ekstrak T. canis pada budaya sel payudara manusia dan sel tumor kolon manusia, dapat diasumsikan bahwa sel MCF-7 lebih sensitif terhadap efek negatif dari bahan uji. Dengan demikian, ini mengikuti dari data pada Tabel 1 bahwa jumlah sel MCF-7 yang layak secara bertahap menurun dari 95,2% dengan dosis minimum 12,5 hingga 79,5% dengan nilai maksimum 2 mg / ml, dibandingkan dengan nilai kontrol 96,8 % Efek penghambatan sedikit dari ekstrak yang dipelajari pada aktivitas proliferasi sel MCF-7 dimanifestasikan ketika sudah pada konsentrasi 50 μg / ml, di mana jumlah sel adalah 151,9 × 10 3 sel / baik, dibandingkan dengan nilai kontrol 181,3 × 10 3 sel / lubang itu. Dengan peningkatan konsentrasi dari 100 μg / ml dan lebih tinggi, efek penghambatan ekstrak meningkat secara proporsional ke konsentrasi dan mencapai nilai maksimum pada 2 mg / ml, di mana jumlah sel menurun tiga kali dibandingkan dengan kontrol dan 60,0x103 sel / baik.

Berdasarkan hasil yang diperoleh dalam pekerjaan ini, kita dapat menyimpulkan sebagai berikut.

1. Ekstrak T. canis yang diteliti memiliki efek antiproliferatif pada sel MCF-7 pada konsentrasi 100, 250, 500, 1 dan 2 mg / ml, yang memanifestasikan dirinya dengan 96 jam inkubasi.

2. Efek ekstrak pada sel MCF-7 tergantung pada dosis.

3. Efek penghambatan ekstrak T. canis pada aktivitas proliferasi dari kultur sel Caco-2 dimanifestasikan pada tingkat lebih rendah dan dalam konsentrasi yang lebih tinggi dari 500, 1 dan 2 mg / ml.

4. Budaya sel MCF-7 lebih sensitif terhadap efek antiproliferatif dari ekstrak T. canis dibandingkan dengan sel Caco-2 dalam model in vitro setelah 96 jam kultur.

1. Kang Y.J., Jo Jo, Cho M.K. et al. Dari infeksi Thrichinella spiralis sel-sel melanoma B16-F10 // Vet. Parasitol. - 2013. - V. 196 (1-2). - P. 106-113.

2. Molinari, J.A., Ebersole, J.L. Efek antineoplastik dari infeksi Trichinella spiralis jangka panjang pada B-16 melanoma // Int. Arch. Alergi Appl. Immunol. - 1977. - V. 55 (1-4). P. 444-448.

3. Pocock D., Meerovitch E. Efek anti-neoplastik dari trichinelosis pada model syngeneic murine // Parasitology. - 1982. - V. 84 (Pt. 3). - P. 463-473.

4. Vasilev S., Ilic N., Gruden-Movsesijan A. et al. Nekrosis dan apoptosis pada reduksi tumor yang dimediasi Trichinella spiralis // Cent. Eur. J. Imunologi. - 2015. - V. 40 (1). - P. 42-53.

5. Wang X.L., Fu B.Q., Yang S.J. et al. Trichinella spiralis agen antitumor potensial // Vet. Parasitol. - 2009. - V. 159 (3-4). - P. 249-252.

6. Wang X.L., Liu M.Y., Sun S.M. et al. Protein anti-tumor yang dihasilkan oleh Trichinella spiralis menginduksi apoptosis pada sel hepatoma manusia H7402 // Vet. Parasitol. - 2013. - V. 194 (2-4). - P. 186-188.

1. Agen dengan aktivitas antiproliferatif, yang merupakan ekstrak protein Toxocara canis, diperoleh dengan mengekstraksi cacing homogenat T. Larutan buffer canis fosfat-salin dengan pH 7,2 dalam rasio 1:10 untuk 36-48 jam pada 4 ° C, dan sentrifugasi.

2. Alat menurut klaim 1, dicirikan bahwa ia memiliki aktivitas antiproliferatif pada model sel tumor manusia secara in vitro.

Efek antiproliferatif adalah

Beberapa fungsi mendasari aksi antiproliferatif dari interferon. Sebagian besar komponen dari aktivitas anti-infeksi interferon memainkan peran dalam efek antitumor mereka.

Peningkatan sintesis protein MX, yang merupakan penghambat transkripsi mRNA, enzim dari sistem sintetase 2'-5'-oligoadenylate, yang menghambat penerjemahan, yang diperlukan untuk sintesis protein seluler, menipisnya simpanan triptofan intraseluler, yang mengarah ke gangguan sintesis protein dalam sel, sangat penting dalam antiproliferatif, termasuk antitumor, tindakan interferon.

Signifikansi perubahan dalam tingkat 2'-5'-sintetase dalam efek antiproliferatif IFN-a dikonfirmasi oleh pengamatan klinis: korelasi ditunjukkan antara tingkat peningkatan tingkat enzim dan efektivitas terapi pada pasien dengan karsinoid usus dan limfoma.

Tidak kurang signifikan dalam aksi antiproliferatif interferon adalah mekanisme lain. Sinyal yang ditransmisikan ke inti sel dengan pengikatan interferon ke reseptor interferon mengurangi ekspresi proto-onkogen, khususnya c-tus dan c-fos, yang terlibat dalam pengaturan pertumbuhan sel.

Penekanan aktivitas proto-onkogen ini mengarah ke blokade siklus sel, akumulasi sel dalam fase G0, dengan hasil bahwa proliferasi melambat atau bahkan berhenti, karena sebagian besar sel mengalami apoptosis. Proses ini reversibel, dan beberapa saat setelah penghilangan interferon, proliferasi sel dapat pulih pada kecepatan yang sama, sementara ekspresi onkogen, ditekan dengan adanya interferon, setelah pengangkatannya dari tubuh juga dapat pulih pada tingkat yang sama.

Demikian pula, efek interferon dalam banyak kasus tidak menyebabkan proses ireversibel dalam sel, genotipe yang berubah di bawah pengaruh integrasi genom virus ke dalam DNA sel. Penggunaan interferon yang berkepanjangan dalam kasus-kasus ini dapat memulihkan fenotipe sel normal, tetapi penghentian tindakan interferon lagi mengarah pada perkembangan tumor.

Penghambatan angiogenesis, pertumbuhan vaskular dan neoplasma, yang memainkan peran penting dalam pertumbuhan tumor dan metastasis, penting dalam antiproliferatif, khususnya, antitumor, tindakan interferon. Sejumlah penelitian tentang mekanisme tindakan terapeutik IFN-a di hemangiomatosis telah menunjukkan bahwa interferon menghambat proliferasi sel endotel dan sel otot polos, menghambat faktor pertumbuhan fibroblast dan angiogenin (faktor pertumbuhan vaskular dan neoplasma), mengurangi produksi kolagen.

Itu menunjukkan bahwa IL-12, yang memiliki efek anti-angiogenik yang menonjol, meningkatkan pembentukan IFN-y dan protein efektor p10-nya.

Pada kultur sel donor yang sehat dan pasien dengan leukemia akut, telah ditunjukkan bahwa IFN-a secara signifikan menghambat aktivitas telomerase, enzim yang mengatur panjang telomer yang diperlukan untuk pembelahan sel. Ada bukti yang dikonfirmasi berulang kali bahwa IFN-y meningkatkan ekspresi antigen FAS dan caspase 3 dan dengan demikian menginduksi apoptosis pada sumsum tulang (CD34 +) progenitor.

Ada bukti bahwa IFN-a bertindak dengan cara yang sama, dan efek efek apoptosisnya ditingkatkan oleh fragmentasi molekul Bax anti-apoptosis yang disebabkan oleh itu. IFN-a juga meningkatkan pelepasan ke dalam darah faktor nekrosis tumor, yang ditujukan untuk degradasi sel tumor.

Jadi, dari data yang tersedia hingga saat ini, jelas bahwa interferon memiliki antiproliferatif, termasuk antitumor, tindakan, diimplementasikan dalam beberapa cara yang sering saling terkait. Dalam efek antitumor interferon, kedua metode yang dijelaskan efek langsung pada tumor dan mekanisme antitumor tidak langsung terkait dengan peningkatan aktivitas makrofag, aktivasi T-sel, pembunuh alami dan peningkatan produksi antibodi adalah penting.

Efek antiproliferatif adalah

Institut Epidemiologi dan Mikrobiologi. N.F. Gamalei RAMS, Moskow

Efek antiproliferatif

Sangat peka terhadap efek AP dari sel-sel tumor, dicirikan oleh pertumbuhan tak terkendali terus menerus, sehingga efek AP memberi harapan untuk aktivitas antitumor IFN. Ratusan peneliti terlibat dalam studi masalah ini, sering menggabungkan dua konsep ini, yang secara klinis salah.

Ketika menggunakan IFN dalam dosis tinggi (> 1 juta IU), efek AP dinyatakan terutama dalam sitopenia. Sel-sel sistem hematopoietik sangat sensitif terhadap IFN. Ini menghambat pertumbuhan dan kemampuan untuk menjajah di sumsum tulang dan limpa. Reproduksi limfosit yang dirangsang mitogen juga ditekan. Sebagai aturan, seri limfoid lebih sensitif terhadap IFN daripada myeloid. Yang paling rentan terhadap aksi interferon erythropoiesis.

Pada saat yang sama, IFN diterapkan dalam dosis harian yang tinggi (3-15 juta IU) menyebabkan sitoreduksi (penurunan jumlah leukosit tumor yang bersirkulasi) rata-rata dari 97,4x10 9 menjadi 4,2x10 9 / l dengan penurunan ukuran limpa [28] pada pasien. leukemia myeloid kronis. Efeknya tergantung pada dosis obat yang diterapkan (yang dicapai karena efek AP), tetapi tindakan tambahan diperlukan untuk mencapai efek antitumor dan penyembuhan, termasuk transplantasi sumsum tulang.

Efek AP bersifat reversibel. Setelah menghentikan pengenalan hematopoiesis IFN sepenuhnya dipulihkan. Pertumbuhan sel tumor juga kembali. Untuk mempertahankan efek AP dalam tubuh membutuhkan pengenalan konstan dari dosis tinggi IFN.

Efek AP jelas terkait dengan aktivasi 2 ', 5'-oligo (A) sintetase, karena dalam budaya yang berbeda ada paralelisme antara tingkat 2', 5'-oligoadenylates dalam sitoplasma dan tingkat penekanan proliferasi. Hubungan ini belum jelas. Satu hal yang tidak diragukan lagi bahwa mekanisme molekuler perkembangan AB dan AP menyatakan pada tahap selanjutnya tampak berbeda. Misalnya, toksin kolera, mengubah keadaan fisikokimia membran sitoplasma dan tingkat cAMP, menghambat perkembangan keadaan AV, tetapi bukan efek AP [29]. Aksi serupa memiliki oubain, puromycin dan cycloheximide dalam konsentrasi tertentu.

Sel-sel jaringan otot-otot, mesenchymal dan epitel di dalam tubuh biasanya resisten terhadap aksi AP dari IFN. Model yang paling sensitif yang digunakan untuk mengukur efek AP dianggap diubah. Daudi line B lymphocytes yang diisolasi dari pasien dengan limfoma Burkitt. Dalam analisis retrospektif, kita dapat menyimpulkan bahwa, dengan potensi antiproliferatif, yang paling aktif adalah IFN-α. Seringkali 10-20 kali lebih efektif daripada IFN-α. Aktivitas IFN- dan IFN- bervariasi tergantung pada jenis sel, tetapi lebih sering IFN- memiliki kelebihan untuk sel-sel jaringan otot-otot. Pada potensi antiproliferatif, baris berikut IFN valid: IFN-> IFN-> IFN-. Harus diingat bahwa efek AP adalah intrinsik untuk semua IFN dan selalu memanifestasikan dirinya secara klinis ketika digunakan dalam dosis tinggi. Karena sindrom klinis biasanya merupakan sitopenia reversibel, disarankan untuk menggunakan IFN dalam dosis harian> 1 juta IU dengan aktivator hematopoietik, misalnya, dengan leukinferon.

Efek AP dimanifestasikan hanya dalam interaksi IFN dengan reseptor spesifik, diikuti oleh pelanggaran mendalam terhadap sintesis makromolekul. Mutan sel yang kehilangan reseptornya menjadi resisten terhadap efek antiviral dan antiproliferatif. Perlu juga diingat bahwa efek antiproliferatif pada dosis rendah bersifat sitostatik: pertumbuhan sel sepenuhnya pulih setelah penghilangan IFN, meskipun ini membutuhkan waktu - setidaknya 24 jam [30, 31].

Sebuah tinjauan dari berbagai pengamatan [32] mengarah pada kesimpulan bahwa efek antiproliferatif IFN secara khusus diucapkan selama periode kesenjangan persiapan (fase G).0, G1, G2), oleh karena itu, sel-sel di mana periode ini pendek, dan sintesis DNA (S-periode) adalah intens, atau mereka berada dalam fase mitosis (fase-M), kurang sensitif.

Diketahui bahwa ada beberapa tingkat dasar 2 ', 5'-oligoadenylate di sitoplasma, yang diperlukan untuk proliferasi. Namun, dengan pengenalan IFN di sebagian besar jaringan, tingkatnya dapat meningkat 10-15 kali. Dengan demikian, pada tikus yang menerima IFN- /, tingkat 2 ', 5'-oligoadenylates di limpa, paru-paru, hati dan, pada tingkat lebih rendah, di timus dan otak mulai meningkat dalam 2-5 jam [33]. Dalam hal ini, misalnya, protein baru dengan massa molekul 15, 16, 20, 53, 79, 87 dan 105 kDa muncul di sitoplasma Daudi, dan tingkat hanya satu protein menurun - 23 kDa. Dalam sel-sel mutan yang resisten terhadap AP-aksi dari garis yang sama, hanya satu protein, 15 kDa, yang jelas tidak diinduksi. Tingkat protein lain berkurang secara signifikan, tetapi mereka masih terdeteksi. Pada saat yang sama, ekspresi c-myc proto-onkogen seluler juga ditekan oleh IFN [34].

Sampai saat ini, diketahui bahwa dalam genom manusia ada sekitar 40 proto-onkogen seluler yang hanya diekspresikan dalam sel embrio, tetapi aktif rendah pada sel yang matang. Menurut data yang dipublikasikan, misalnya, dalam katak yang memacu dalam proses pematangan telur di masing-masing dari mereka terakumulasi hingga 8 juta salinan gen c-myc, pada tahap pembiakan matang, tingkatnya juga tetap sangat tinggi - 5 juta eksemplar, tetapi kemudian setelah pembuahan mereka didistribusikan selama pembagian. dan setiap sel kecebong sudah mengandung hanya 20-50 salinan c-myc, yaitu. hampir sama dengan seseorang.

Dalam genom manusia, c-myc sedikit diekspresikan dalam sel matang. Namun, dalam embriogenesis, serta selama operasi bedah, perbaikan dan proses regenerasi dari genesis lain, c-myc dan pertumbuhan lainnya oncogenes c-ras dan c-abl terjadi. Proto-onkogen ini mutlak diperlukan untuk permulaan proliferasi. Aktivasi proto-onkogen pertumbuhan merangsang sel untuk bertransisi dari fase G0/ G1 ke tahap selanjutnya dari siklus sel - S, G2 dan mitosis (M). Namun, pertumbuhan jaringan secara genetis ditentukan dan dikontrol secara ketat dengan partisipasi faktor pertumbuhan, inhibisi kontak, dan faktor apoptosis [22]. Pengatur utama ekspresi pertumbuhan proto-onkogen adalah protein p53, yang gennya secara luas diwakili dalam genom mamalia.

Dalam sel-sel sistem hematopoietik, ekspresi gen p53 mengarah ke fenomena fisiologis - kematian terprogram - apoptosis. Mencegah protein bcl-2 gen ini. Dengan demikian, peningkatan ekspresi proto-onkogen pertumbuhan menciptakan kondisi untuk pertumbuhan dan keganasan yang tidak terkontrol (terutama dengan mutasi titik yang mengubah proto-onkogen menjadi onkogen, atau ketika itu dimasukkan ke dalam genom virus dan dipengaruhi oleh peningkat virus). Penurunan ekspresi mereka di bawah aksi IFN atau p53 (protein Rb juga terlibat, yang tidak dipertimbangkan di sini) menghambat pertumbuhan dan proliferasi. Namun, tentu saja, proses-proses ini tidak terbatas pada, pada kenyataannya, mereka jauh lebih rumit.

Pada transformasi tumor, aktivasi c-myc dan oncogen pertumbuhan lainnya harus terjadi. Menariknya, untuk mempertahankan fenotipe yang berubah, ekspresi konstan onkogen dan keberadaan onkoprotein dalam sitoplasma diperlukan. Pengenalan onkoprotein ke sel normal mengarah pada munculnya tanda-tanda fenotipik transformasi, yang mulai menghilang saat onkoprotein terdegradasi. Pengenalan antibodi terhadap onkoprotein ke dalam sitoplasma sel yang ditransformasi juga menyebabkan pemulihan sementara sel-sel normal fenotip. Jadi, sel yang berubah yang telah kehilangan fungsi-fungsi spesifiknya (diferensiasi) dan dicirikan oleh pertumbuhan yang tidak terkendali, sambil menekan ekspresi onkogen pertumbuhan di bawah pengaruh IFN, dapat dikembalikan ke norma fenotipik. Sangat penting untuk mengenal setiap dokter.

Ada beberapa cara untuk mengaktifkan proto-onkogen selular - mutasi titik, amplifikasi genomik, akumulasi transkrip atau, akhirnya, translokasi gen, dijelaskan untuk leukemia myeloid kronis (gen c-abl 9:22) atau limfoma Burkitt (gen c-myc 8:14) [35]. Gen translocated dipengaruhi oleh promotor baru dan dapat diaktifkan. Virus onkogenik membawa onkogen ini (biasanya dengan perubahan kecil) dan mampu mengintegrasikannya ke dalam genom dapat memainkan peran penting. Namun, tidak ada keraguan bahwa mutasi pada gen p53, yang ditemukan pada setidaknya 50% sel tumor karakteristik Amerika Serikat dan Inggris, kemungkinan besar untuk tumor manusia [36]. Diasumsikan bahwa fakta mutasi gen p53, yang mengurangi kontrol atas aktivitas onkogen pertumbuhan, hanya menciptakan kondisi untuk pertumbuhan tumor. Manifestasi klinis mereka harus diharapkan dalam interval hingga 30 tahun, ketika sinyal lain dihidupkan atau mekanisme kekebalan antitumor melemah.

Kemampuan IFN untuk mencegah proses antitumor tidak dapat disangkal, jika hanya melalui efek pada ekspresi onkogen pertumbuhan. Tetapi mereka tidak dipelajari sama sekali.

Menggunakan contoh gen c-myc di sel Daudi untuk pertama kalinya pada tahun 1984, itu menunjukkan bahwa IFN tipe I dapat dianggap sebagai pengatur negatif dari ekspresi onkogen pertumbuhan, yang setidaknya sebagian menjelaskan efek AP dalam jaringan normal [37]. Kemudian, efek ini juga diamati dengan onkogen pertumbuhan c-Ha-ras lainnya. Efeknya lebih sering diwujudkan pada tingkat terjemahan onkogen (tingkat protein). Dengan menggunakan contoh c-myc, ditunjukkan bahwa protein pengikat DNA p62 kDa, yang merupakan produk dari c-myc, diperlukan untuk ligasi fragmen DNA Okazaki ke dalam sebuah heliks tunggal. Penekanannya dengan pengenalan IFN mencegah sintesis DNA baru, diikuti dengan penghambatan proliferasi.

Namun, ada contoh lain dari penghambatan replikasi tanpa efek yang nyata pada ekspresi pertumbuhan proto-onkogen (sel-sel dari seri monosit I-937, HL-60, erythroleukemia Teman, Balb c / 3T3). Sistem 2 ', 5'-oligo (A) sintetase-RNase L dapat memainkan peran penting dalam proses ini, memastikan degradasi cepat mRNA yang baru disintesis diperlukan untuk proliferasi [38].

Efek imunomodulator

Selama hampir satu dekade, persiapan IFN telah digunakan sebagai agen antivirus yang dapat melindungi sel dari infeksi virus tanpa partisipasi efektor imun. Meskipun sudah ada sejumlah pengamatan klinis, misalnya, stimulasi proses reparatif pada luka, termasuk yang sangat terinfeksi [39, 40], dan luka bakar yang luas [41] tidak sesuai dengan skema umum dan membutuhkan pemikiran baru [2].

Minat yang besar tertarik dengan penelitian yang dilakukan di Pusat Primata di Belanda, yang menunjukkan bahwa monyet terinfeksi dengan strain virus vaccinia yang sangat rentan atau mutannya, resisten terhadap IFN, yang praktis tidak dapat dicapai dalam tubuh (> 10 ribu IU), dengan berikutnya Dalam pengobatan IFN, tidak ada perbedaan yang signifikan dalam dinamika klinis dan intensitas kekebalan yang dikembangkan. Dalam kedua kasus, IFN mencegah kerusakan virus. Ini menunjukkan peran dominan dari efektor imun yang diaktifkan oleh IFN dalam proses eliminasi virus dan pemulihan klinis selanjutnya.

Dari sudut pandang hari ini, dapat dikatakan bahwa aktivasi respon imun seluler nonspesifik dan pengaturan efektor dalam respon imun, tampaknya, adalah fungsi utama IFN dalam tubuh [4]. Ketika berinteraksi dengan patogen, IFN diproduksi oleh makrofag dan limfosit, terjadi reaksi peradangan, yang mengarah pada penghancuran patogen dalam fokus dengan kerusakan minimal pada jaringan normal. Diketahui bahwa kesehatan normal didukung terutama oleh reaksi imunitas selular non-spesifik yang dilakukan oleh trias efektor imun yang diketahui: makrofag, limfosit T-helper dan fagosit neutrofilik. Makrofag dalam hal ini dianggap sebagai universal antigen-presenting cell (APC), menyajikan antigen yang diproses ke T-limfosit, bersama dengan mengaktifkan sitokin. Peran AIC juga dilakukan oleh sel dendritik dan sel Langerhans (kulit). Tetapi esensi dari fenomena itu tidak berubah. AIC memaksakan antigen yang diproses secara kompleks dengan kompleks histocompatibility utama (MHC) kelas 2 (antigen virus dan tumor dalam kompleks dengan MHC kelas 1), yang harus diakui oleh reseptor T-cell (TCR) dari limfosit SD3 +. Telah diketahui bahwa imunogenisitas antigen yang diproses meningkat sekitar 10.000 kali, dan 100 kompleks antigen kelas 2 + MHC dapat berinteraksi dengan 18.000 TCR [42]. Ini mencirikan efektivitas pengakuan kekebalan.

Peran antigen dapat dilakukan oleh patogen apa pun, yang pertama kali terbunuh oleh reaksi pembunuhan peroksida, kemudian diinternalisasi. Reaksi respons non-spesifik berikutnya ditunjukkan pada Gambar. 1. Di bawah aksi antigen, makrofag harus diaktifkan, menghasilkan autokrin INF-a dan IL-6. Antigen MHC kelas 2 tidak terus-menerus diekspresikan pada makrofag dan penampilannya dirangsang oleh IFN-α dan IL-4. Proses ini ditekan oleh faktor pertumbuhan transformasi TGF-α, yang juga dapat diproduksi oleh makrofag. Sumber IFN-selalu diaktifkan T-limfosit.

Kontak langsung makrofag dan limfosit T-helper, yang dilakukan melalui struktur antigen kelas 2 + MHC dan TCR, juga dilengkapi oleh ICAM transmembran glikoprotein. Ini memberikan pembatasan respon imun, tetapi tidak cukup untuk mengaktifkan limfosit-T. Sinyal kedua diperlukan dalam bentuk kompleks sitokin yang dihasilkan oleh makrofag yang diaktifkan: ini terutama IFN-a, serta IL-1, IL-6, IL-12, TNF-α, yang berinteraksi dengan reseptor terkait pada sel T-helper.

Limfosit T-helper aktif, mendukung makrofag, melepaskan sitokin seperti IFN- (menstimulasi ekspresi MHC kelas 2) dan IL-4 (mengaktifkan gen MHC kelas 1), MIF dan LIF yang mempertahankan makrofag di sumber peradangan dan penstimulasi koloni faktor (CSF) - M-CSF dan GM-CSF. Karena efek yang saling seimbang dari makrofag yang diaktifkan dan limfosit T-helper, keadaan aktivasi mereka dipertahankan dan amplifikasi respon imun dicapai dengan mempercepat diferensiasi makrofag dari prekursor monosit / makrofag awal.

Sinyal aktivasi dari makrofag (IFN-, IL-1, TNF-α, IL-8, G-CSF dan GM-CSF) dan limfosit T-helper (IFN-, IL-3) dirasakan oleh fagosit neutrofilik, berkontribusi terhadap diferensiasi dan merangsang fagositosis fungsi. Ini meningkatkan semua parameter fagositosis - jumlah neutrofil tersegmentasi matang, pembentukan peroksida, indeks dan nomor fagositik, dan juga (yang paling penting) penyelesaian fagositosis. Kita dapat mengatakan bahwa lingkaran ini tertutup.

Sinyal negatif utama untuk keseluruhan sistem adalah IL-10, yang dapat diproduksi oleh makrofag dan limfosit T. Tetapi peran pengaturan utama dalam proses ini adalah milik T-limfosit. Antibodi spesifik mungkin tidak berpartisipasi dalam reaksi ini.

Seluruh set reaksi eliminasi antigen seluler yang melibatkan makrofag (atau APC lain), limfosit T dan fagosit neutrofilik, di mana tidak diperlukan proliferasi dan diferensiasi T-limfosit, dapat dianggap sebagai fase pertama dari respon imun. Hal ini terkait erat dengan yang berikut - fase kedua, yang dimulai pada tingkat proliferasi limfosit T dan menentukan arah utama dalam reaksi selanjutnya dari organisme terhadap patogen, ketika seluler (atau, khususnya, HRT) atau jalur humoral imunogenesis mulai menyala.

Fase pertama dari respon imun terus berfungsi dan, tampaknya, respon langsung utama dari tubuh dengan beban patogen rendah. Ternyata segera setelah pengakuan antigen. Pesertanya adalah efektor imun yang dibedakan oleh saat ini, tetapi, di sisi lain, dialah yang menciptakan dasar untuk reaksi kekebalan berikutnya. Peran protektif dari reaksi fase pertama respon imun sangat tinggi dan tampaknya diremehkan oleh dokter.

Masuk ke akun Anda

A.N. Moses, Ph.D. basah Ilmu Pengetahuan, LLC "BIOTECH-FARM", St. Petersburg

P.I. Baryshnikov, Dr. basah. Ilmu Pengetahuan, Profesor, Altai AGAU, Barnaul

Keluarga sitokin termasuk interferon (selanjutnya disebut IFN), interleukin, kemokin, pertumbuhan dan faktor penstimulasi koloni, yang menandakan molekul polipeptida dari sistem kekebalan. Memiliki spektrum aktivitas biologis yang luas, mereka tidak hanya menentukan tingkat respons kekebalan yang memadai, tetapi juga mengatur interaksi sistem integratif utama tubuh - saraf, kekebalan tubuh, dan endokrin.

Struktur dan mekanisme kerja sebagian besar sitokin dikarakterisasi secara lengkap. Karena penggunaan metode rekayasa genetika dan bioteknologi modern, banyak sitokin saat ini diproduksi dalam bentuk preparat rekombinan yang identik dengan molekul endogen, dalam jumlah yang cukup untuk penggunaan klinisnya.

Banyak mikroorganisme - bakteri, ragi, virus - digunakan sebagai penerima bahan genetik asing untuk memperoleh strain rekombinan - produsen produk bioteknologi. Jadi diperoleh strain rekombinan E. coli, menghasilkan interferon, insulin, hormon pertumbuhan, berbagai antigen; strain B. subtilis yang menghasilkan interferon; ragi memproduksi interleukin, dll.

Penggunaan sitokin rekombinan, menyediakan koreksi medis yang tepat dan ditargetkan dari disfungsi kekebalan tubuh, meningkatkan efektivitas imunoterapi dan pengobatan secara umum. Sitokin yang dimasukkan ke dalam tubuh mengkompensasi kekurangan molekul regulasi endogen dan sepenuhnya mereproduksi efeknya. Hal ini sangat penting dalam kondisi patologi berat atau kronis, ketika penggunaan imunomodulator tradisional atau induser sintesis sitokin tidak berguna karena berkurangnya kemampuan kompensasi sistem kekebalan tubuh. Saat ini, terapi dengan sitokin rekombinan adalah salah satu area imunofarmakologi yang paling menjanjikan dan terus berkembang.

Jadi, efek antiviral dan antiproliferatif memiliki interferon tipe pertama (selanjutnya - IFN-α, IFN-β). Tempat khusus dalam cahaya ide-ide modern tentang mekanisme molekuler dari respon imun milik interferon gamma (selanjutnya - IFN-γ) - sitokin regulasi dari respon imun.

Atas dasar interferon rekombinan, berbagai perusahaan telah mengembangkan obat untuk hewan dan manusia, yang digunakan untuk mengobati dan mencegah penyakit infeksi, terutama etiologi virus.

IFN rekombinan dalam tubuh hewan dan manusia dalam pengobatan dan pencegahan penyakit berbagai etiologi memberikan koreksi medis yang memadai dan ditargetkan dari disfungsi imun, melengkapi kekurangan molekul regulasi endogen dan sepenuhnya mereproduksi efeknya. Efisiensi imunokorektif yang tinggi, prediktabilitas dan selektivitas tindakan mereka adalah karena adanya reseptor spesifik pada sel dan keberadaan mekanisme alami untuk eliminasi mereka. Sediaan farmasi berdasarkan IFN rekombinan adalah agen yang kuat dari terapi berorientasi imuno patogenetik dan memiliki efek pengganti langsung dan berbagai efek induktif. Saat ini, mereka banyak digunakan dalam pengobatan penyakit menular, onkologi dan beberapa penyakit hewan lainnya.

Klasifikasi interferon

Interferon (IFN, IFN) adalah nama umum di mana saat ini menyatukan sejumlah protein aktif biologis atau glikoprotein dengan sifat serupa yang disintesis oleh sel-sel tubuh selama reaksi protektif sebagai respons terhadap invasi agen asing - infeksi virus atau efek antigenik. Berkat interferon, sel-sel menjadi kebal terhadap virus.

Interferon adalah keluarga multigenik dari sitokin yang dapat diinduksi dengan berbagai fungsi, termasuk antivirus, antiproliferatif, antitumor, dan imunomodulasi.

Saat ini, lebih dari 20 IFN diketahui, berbeda dalam struktur, sifat biologis dan mekanisme aksi yang dominan. IFN dibagi menjadi tiga jenis:

• Tipe I, yang dikenal sebagai interferon viral, termasuk IFN-α (leukosit, disintesis oleh monosit aktif dan limfosit B), IFN-β (fibroblastik, disintesis oleh fibroblas, sel epitel dan makrofag) dan IFN lainnya. Jenis pertama (IFN-α, IFN-β) terutama ditandai oleh efek antiviral dan anti-proliferasi, dan pada tingkat lebih rendah - efek imunomodulator. Mereka diproduksi langsung setelah pertemuan dengan patogen - mereka diinduksi dalam proses infeksi virus, tindakan mereka ditujukan untuk melokalisasi patogen dan mencegah penyebarannya di dalam tubuh. Induktor IFN-α dan -β adalah virus, RNA (terutama untai ganda), lipopolisakarida (LPS), komponen dari beberapa bakteri. Di antara virus, penginduksi interferon terkuat adalah genom RNA. Virus DNA adalah induser lemah (dengan pengecualian poxvirus).

• Tipe II, yang dikenal sebagai kekebalan, termasuk IFN-γ (disintesis oleh limfosit-T teraktivasi dan sel-sel NK). Efek utama interferon tipe kedua (IFN-γ) adalah partisipasi dalam reaksi kekebalan. Ini mulai diproduksi pada tahap berikutnya dari proses infeksi oleh limfosit T yang sudah peka dan aktif berpartisipasi dalam kaskade respon imun spesifik. Zat interferonogenik, antigen, T-mitogen dan beberapa sitokin mampu memicu produksi IFN-γ. Sel target untuk IFN-γ adalah makrofag, neutrofil, sel pembunuh alami, limfosit T sitotoksik, yang memiliki reseptor pada permukaannya untuk IFN-γ. Produksi IFN-γ berada di bawah kendali sitokin. IL-12 dan IL-18 meningkatkan ekspresinya, dan IL-2 berkontribusi pada fungsi CD4 + limfosit, mengaktifkan produksi IFN-γ. Jumlah latar belakang IFN-γ selalu ada di dalam tubuh, bahkan jika tidak ada infeksi: misalnya, analisis status interferon menunjukkan pada orang sehat dan hewan selalu jumlah IFN yang pasti dalam darah, ketika dirangsang atau terinfeksi, itu meningkat berkali-kali. Namun, selama infeksi herpes dan pada tahap akhir dari proses tumor, jumlah IFN-γ cenderung nol, karena virus herpes dan sel kanker menghasilkan protein yang menghalangi sintesis IFN-γ. Oleh karena itu, dengan infeksi virus herpes dan kanker, penginduksi interferon tidak bermakna, mereka perlu diperkenalkan ke dalam tubuh dari luar.

• Tipe III ditemukan kemudian pada tipe I dan tipe II; informasi tentang itu menunjukkan pentingnya IFN tipe III dalam beberapa jenis infeksi virus.

Viral interferon (IFN-α / β) diinduksi selama infeksi virus, dan sintesis interferon tipe II (IFN-γ) diinduksi oleh stimulus mitogenik atau antigenik. Sebagian besar jenis sel yang terinfeksi virus mampu mensintesis IFN-α / β dalam kultur sel. Sebaliknya, IFN-γ disintesis hanya oleh beberapa sel sistem kekebalan, termasuk sel pembunuh alami (NK), sel T CD4, dan sel penekan sitotoksik CDS.

Efek antivirus dari interferon

Interferon tidak bertindak langsung terhadap virus. Di bawah pengaruh mereka, sel menjadi resisten terhadap infeksi. Interferon adalah garis pertahanan pertama terhadap infeksi virus, karena mereka mulai diproduksi segera setelah kontak dengan virus. Pada saat yang sama, tingkat keparahan respon berbanding lurus dengan dosis yang menginfeksi.

Beberapa virus dapat memblokir efek antivirus IFN. Misalnya, adenovirus menghasilkan RNA spesifik, yang mencegah aktivasi protein kinase.

Pengikatan IFN ke reseptor menginduksi tiga proses yang terjadi secara bersamaan di dalam sel, yang berakhir:

• aktivasi endoribonuklease laten, yang mengarah ke penghancuran RNA virus;

• penekanan sintesis RNA messenger virus;

• penekanan sintesis protein envelope virus.

Mekanisme ini secara integral menerapkan efek antivirus, yang mengarah ke penekanan replikasi virus.

Efek imunomodulator dari interferon

IFN tidak hanya antiviral, tetapi juga efek imunomodulator karena efek pada ekspresi reseptor dari major histocompatibility complex (MHC). IFN meningkatkan ekspresi molekul MHC kelas 1 pada semua jenis sel, sehingga meningkatkan pengenalan sel yang terinfeksi oleh sitotoksik T-limfosit (CTL). Selain itu, IFN-γ meningkatkan ekspresi molekul MHC kelas 2 pada sel-sel yang menyajikan antigen, yang menghasilkan peningkatan presentasi antigen virus ke CD4 + limfosit dan sel pembunuh alami (sel NK) diaktifkan. IFN juga menstimulasi fagositosis.

Pengaturan respon imun oleh sitokin, termasuk interferon, terjadi sesuai dengan prinsip relai, efek sitokin pada sel menyebabkan pembentukan sitokin lain (cytokine cascade).

Efek antiproliferatif dari interferon

Efek antiproliferatif IFN dijelaskan oleh mekanisme berikut:

• aktivasi sel sitotoksik;

• peningkatan ekspresi antigen terkait tumor;

• modulasi produksi antibodi;

• penghambatan aksi faktor pertumbuhan tumor;

• penghambatan sintesis RNA dan protein sel tumor;

• memperlambat siklus sel dengan transisi ke fase istirahat;

• stimulasi sel tumor hingga matang;

• restorasi kontrol terbatas atas proliferasi;

• penghambatan pembentukan pembuluh darah baru di tumor;

• biomodulasi aktivitas sitostatik: perubahan dalam metabolisme dan penurunan izin;

• mengatasi resistensi obat karena penghambatan gen resistensi multi-obat.

Efek antibakteri dari interferon

Dalam beberapa tahun terakhir, telah ditunjukkan bahwa IFN juga memiliki efek antibakteri, yang didasarkan pada kemampuan IFN untuk menginduksi aktivitas enzim tertentu dalam sel yang terkena.

Selain itu, peran antibakteri IFN-γ terdiri dalam aktivasi makrofag yang menghasilkan sitokin pro-inflamasi, serta bentuk aktif oksigen dan nitrogen, prostaglandin. Faktor-faktor ini berkontribusi pada pengembangan proses inflamasi yang mengarah ke kematian bakteri.

Dengan demikian, semua interferon adalah sekelompok faktor protein polyfunctional dengan efek antiviral dan antitumor yang diucapkan dari berbagai derajat. IFN-α memiliki aktivitas antiviral terkuat di antara semua interferon, dan IFN-γ memiliki aktivitas antiproliferatif yang lebih jelas. Semua interferon memiliki efek imunoregulasi dengan berbagai tingkat keparahan (IFN-γ memiliki maksimum) - mereka meningkatkan aktivitas makrofag, limfosit-T dan sel-NK.