Amplisens hcv fl

Gejala

Dari panas di lisses, taman dan kebun, kuncinya aktif. Tom perebuvayuchi pada alam, varto poturbuvatsya tentang vslnu bepeke, abi.

03/01/2017

Tes AmniSure

Anda juga dapat membeli tes untuk menentukan kebocoran cairan amnion dari hamil Amnyshur di apotek di Kiev:
1. Farmasi "Arnica".

08.26.2016

FLOROCENOSIS

Tes komprehensif dari generasi baru untuk diagnosis SEMUA infeksi klinis yang signifikan dari saluran urogenital pada wanita usia reproduksi..

INSTRUKSI. "AmpliSense HCV-genotype-FL" AmpliSense

Transkrip

1 INSTRUKSI untuk penggunaan kit reagen untuk mendeteksi dan membedakan genotipe virus hepatitis C (HCV) dalam bahan klinis dengan metode polymerase chain reaction (PCR) dengan deteksi hibridisasi-fluoresensi real-time AmpliSense HCV genotipe-FL AmpliSense Federal budget institution Ilmu "Pusat Penelitian Institut Epidemiologi", Federasi Rusia,, Moskow, Novogireevskaya jalan, 3a

2 DAFTAR ISI DAFTAR SINGKATAN. 3 TUJUAN. 3 PRINCIPLE DARI METODE INI. 3 FORMAT DAN FORMAT DARI MASALAH REAGENT KIT. 5 KARAKTERISTIK ANALITIS. 5 TINDAKAN. 6 BAHAN DAN PERALATAN TAMBAHAN. 7 KONEKSI, TRANSPORTASI, DAN PENYIMPANAN MATERIAL YANG DIINVESTASI. 9 KOMPOSISI FRT FORMAT MELAKUKAN EKSTRAKSI REKSA RETRASI PCR DARI PENELITIAN SAMPEL MELAKUKAN REAKSI TRANSKRIPSI REVERS A. Persiapkan tabung untuk transkrip terbalik. Persiapan tabung amplifikasi menggunakan kit reagen kit PCR. FRT-G A2 varian. Persiapan tabung untuk amplifikasi menggunakan kit reagen PCR-kit (opsi FRT-G) B. Melakukan amplifikasi dengan sistem deteksi dalam mode real-time ANALISIS DAN INTERPRETASI HASIL PERSYARATAN VALIDITAS, TRANSPORTASI DAN PENYIMPANAN RIBO-Sorb "LAMPIRAN 2. RNA EKSTRAKSI MENGGUNAKAN SET REIBENT DARI" RIBO-persiapan "SIMBOL DIGUNAKAN DALAM PRINT PRODUK x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 2 dari 32

3 DAFTAR SINGKATAN Dalam instruksi ini, singkatan dan notasi berikut digunakan: DNA deoxyrubonucleic acid cdna bebas DNA RNA ribonucleic acid DARI reverse transcription EKR sampel kontrol internal JCE sampel kontrol negatif OCR sampel kontrol positif K + - kontrol positif PCR K - kontrol negatif PCR OK - negatif ekstraksi kontrol PCR polymerase chain reaction FBUN Central Research Institute of Epidemiology Rospotrebnadzor HCV FRT APPOINTMENT Lembaga anggaran federal "Pusat Penelitian Institut Epidemiologi" dari Layanan Federal untuk Pengawasan Perlindungan Hak Konsumen dan Kesejahteraan Manusia Virus Hepatitis C Pendeteksi Fluoresen dalam "Real Time" AmpliSense HCV Genotipe-FL Reagen Kit dirancang untuk mengidentifikasi dan membedakan genotipe dari virus hepatitis C (HCV) dalam bahan klinis dengan metode polymerase chain reaction (PCR) dengan deteksi hibridisasi-fluoresensi dalam mode "waktu nyata". Penentuan HCV genotipe 1a, 1b, 2, 3a, 4 dilakukan menggunakan varian "PCR kit" FRT-g1-4; HCVa 1a, 1b, 2, 3a, 4, 5a, 6 genotipe ditentukan menggunakan varian "PCR kit" FRT-g1-6. Kit reagen ini direkomendasikan untuk digunakan setelah mendeteksi RNA HCV dalam sampel yang diteliti menggunakan kit reagen yang dirancang untuk penentuan kualitatif dan kuantitatif RNA virus hepatitis C (misalnya, AmpliSense HCV-FL, menggunakan deteksi fluoresensi hibridisasi, atau AmpliSense HCV- EPh "menggunakan deteksi elektroforetik dari produk amplifikasi (diproduksi oleh FBUN TsNII Epidemiology Rospotrebnadzor)). PERHATIAN! Hasil penelitian PCR diperhitungkan dalam diagnosis penyakit yang komprehensif. 1. PRINSIP METODE 1 Sesuai dengan European Union Directive 98/79 / EC. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 3 dari 32

4 Prinsip pengujian didasarkan pada ekstraksi RNA dari plasma darah bersama dengan sampel kontrol internal rekombinan (ASD), melakukan reaksi transkripsi terbalik dari RNA dan PCR amplifikasi cdna dengan deteksi hibridisasi-fluoresensi dalam "real time". Untuk mengecualikan hasil negatif palsu, VKO diperkenalkan ke dalam penelitian, yang memungkinkan mengendalikan semua tahap analisis dan mengevaluasi efek inhibitor PCR pada hasil penelitian. Penentuan genotipe HCV dari satu sampel dilakukan di beberapa tabung reaksi, di setiap tabung uji, dua genotipe HCV atau satu HCV dan genotipe VKO dibedakan. Kit ini dirancang untuk instrumen dengan dua atau lebih saluran deteksi fluoresensi. Tabel ini menunjukkan saluran-saluran di mana genotipe HCV dideteksi untuk setiap campuran reaksi. Campuran reaksi 1b / 3a 1a / 2 BKO / 4 5a / 6 2 Saluran HCV yang Dapat Dideteksi genotip FAM / Hijau 1b 1a CTP 5A JOE / HEX / Kuning / Cy3 3a Versi FRT-g1-6 disertakan dalam kit PCR. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 4 dari 32

5 FORMAT DAN FORMAT DARI REAGENT KITS YANG DITENTUKAN Kit reagen tersedia dalam 1 format: format FRT Kit reagen tersedia dalam 7 perangkat konfigurasi: Formulir 1 termasuk opsi kit reagen RIBO-sorb 50, opsi REVERTA-L 50, kit PCR Varian FRT-g1-4. Formulir 2 termasuk opsi kit reaktif “RIBO-prep” 50, opsi "REVERT-L" 50, opsi "PCR kit" FRT-g1-4. Formulir 3 termasuk opsi kit reagen “PCR kit” FRT-g1-4. Formulir 4 termasuk kit reagen "RIBO-sorb", opsi 50, pilihan "REVERT-L", opsi 50, "PCR kit" FRT-g1-6. Formulir 5 mencakup opsi kit reaktif “RIBO-prep” 50, opsi "REVERT-L" 50, opsi "PCR kit" FRT-g1-6. Formulir 6 mencakup opsi kit reagen “PCR kit” FRT-g1-6. Formulir 7 termasuk kit reagen massal, dikemas dalam reagen terpisah, dengan label reagen pada kemasan curah mereka. Formulir penyelesaian 1, 2, 3 dirancang untuk menentukan genotipe 1a, 1b, 2, 3a, 4 dari virus hepatitis C. Penyempurnaan bentuk 4, 5, 6 dimaksudkan untuk menentukan genotipe 1a, 1b, 2, 3a, 4, 5a, 6 dari virus hepatitis C. Selesai formulir 1, 2, 4, 5 dirancang untuk studi PCR lengkap, termasuk ekstraksi RNA dari bahan klinis, transkripsi reverse RNA dan PCR amplifikasi cdna dengan deteksi hibridisasi-fluoresensi dalam "real time". Bentuk bundling 3 dan 6 dimaksudkan untuk melakukan amplifikasi PCR dari CDNA dengan deteksi hibridisasi-fluoresensi dalam mode "real time". Untuk melakukan studi PCR lengkap, perlu menggunakan kit reagen yang diproduksi oleh Lembaga Penelitian Epidemiologi Rospotrebnadzor untuk ekstraksi RNA (reagen kit "RIBO sorb" atau "RIBO-prep") dan melakukan reaksi transkripsi terbalik (reagent kit REVERTA-L). Bentuk pemetikan 7 dimaksudkan untuk tujuan produksi untuk pelabelan berikutnya dalam bahasa pelanggan dan memilih pada set. PERHATIAN! Menggunakan formulir set 7 dibuat hanya sesuai dengan peraturan yang disetujui oleh FBUN Central Research Institute of Epidemiology of Rospotrebnadzor. KARAKTERISTIK ANALITIS 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 5 dari 32

6 Sensitivitas analitis Ekstraksi volume, µl RNA / DNA ekstraksi kit 100 "RIBO-sorb" 100 "RIBO-persiapan" Amplifikasi dan deteksi kit "PCR kit" versi FRT-g1-4, "PCR kit" opsi FRT- g1-6 "PCR kit" versi FRT-g1-4, "PCR kit" versi FRT-g1-6 Sensitivitas analitis, IU / ml 2,5x10 3 5x10 3 Spesifisitas analitik Penilaian spesifisitas analitis kit reagen tidak menunjukkan reaksi silang antara genotipe 1a, 1b, 2, 3a, 4, 5a dan 6 dari virus hepatitis C menggunakan rekombinan yang sangat pekat sampel kontrol positif kovarian dan sampel plasma darah yang sesuai dengan genotipe HCV. PENCEGAHAN Pekerjaan harus dilakukan di laboratorium melakukan studi bahan klinis molekuler biologis (PCR) untuk kehadiran patogen penyakit menular, mengikuti aturan sanitasi dan epidemi dari usaha patungan "Keselamatan kerja dengan mikroorganisme patogenisitas IV III (bahaya) dan patogen penyakit parasit", SanPiN "Sanitary -persyaratan epidemiologi untuk pengobatan limbah medis "dan pedoman MU" Organisasi laboratorium menggunakan metode amplifikasi n asam kleinovyh ketika bekerja dengan bahan yang mengandung mikroorganisme kelompok patogenisitas Aku IV". Ketika bekerja, selalu mematuhi persyaratan berikut: - Sampel yang diuji harus dianggap menular, mengatur pekerjaan dan penyimpanan sesuai dengan usaha patungan "Keselamatan kerja dengan mikroorganisme dari kelompok III pathogenicity IV (bahaya) dan patogen penyakit parasit." - Bersihkan dan desinfeksi sampel yang tumpah atau reagen menggunakan disinfektan sesuai dengan Joint Venture "Keamanan kerja dengan mikroorganisme kelompok patogenisitas III III (bahaya) dan patogen penyakit parasit". - Proses laboratorium harus searah. Analisis dilakukan dalam 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / p. 6 dari 32

7 kamar terpisah (zona). Pekerjaan harus dimulai di Zona Seleksi, dilanjutkan di Area Amplifikasi dan Deteksi. Jangan mengembalikan sampel, peralatan dan reagen ke area di mana tahap sebelumnya dari proses itu dilakukan. - Hapus reagen yang tidak digunakan sesuai dengan SanPiN "Persyaratan sanitasi-epidemiologi untuk pengelolaan limbah medis." PERHATIAN! Ketika membuang limbah setelah amplifikasi (tabung berisi produk PCR), tidak dapat diterima untuk membuka tabung dan menaburkan isinya, karena ini dapat menyebabkan kontaminasi area laboratorium, peralatan dan reagen dengan produk PCR. Gunakan kit secara ketat untuk tujuan yang dimaksudkan, sesuai dengan manual ini. Hanya izinkan personel yang terlatih khusus untuk bekerja dengan kit. Jangan gunakan perangkat setelah tanggal kedaluwarsa. Gunakan sarung tangan sekali pakai, jas lab, lindungi mata saat bekerja dengan sampel dan reagen. Cuci tangan dengan bersih setelah bekerja. Hindari kontak dengan kulit, mata dan selaput lendir. Setelah kontak, segera basuh area yang terkena dengan air dan dapatkan bantuan medis. Lembar data keamanan bahan (lembar data keamanan material MSDS) tersedia berdasarkan permintaan. BAHAN TAMBAHAN DAN PERLENGKAPAN ZONA 1. Ekstraksi RNA dari bahan klinis 1. Kit reagen untuk isolasi RNA / DNA “Ribo-sorb” (TU), “persiapan RIBO” (TU) atau yang lain direkomendasikan oleh FBUN Pusat Penelitian Institut Epidemiologi Rospotrebnadzor untuk bekerja dengan set lengkap 3, kotak Laminar. 3. Pusaran. 4. Microcentrifuge untuk tabung jenis Eppendorf hingga 12 ribu g. 5. Thermostat untuk tabung jenis Eppendorf dari 25 hingga 100 C. 6. Dispenser otomatis volume variabel (dari 5 hingga 50 μl, dari 20 hingga 200 μl dan dari 100 hingga 1000 μl). 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 7 dari 32

8 7. Sekrup polypropylene sekali pakai atau menutup tabung 1,5 ml dengan rapat. 8. Tips pakai dengan filter hingga 100 µl, hingga 200 µl dan hingga 1000 µl dalam tripod. 9. Vacuum aspirator medis dengan perangkap labu untuk menghilangkan supernatan. 10. Tip pakai hingga 200 µl per tripod. 11. Tripod untuk tabung 1,5 ml. 12. Kulkas dari 2 sampai 8 13. 13. Gaun ganti terpisah, topi, sepatu dan sarung tangan sekali pakai menurut Kapasitas MU dengan larutan disinfektan. ZONA 2. Melaksanakan reaksi transkripsi terbalik dan amplifikasi dalam mode “waktu nyata” 1. Kit reagen untuk melakukan reaksi transkripsi terbalik “REVERTA-L” (TU) ketika bekerja dengan formulir konfigurasi 3, Kotak media udara yang bersifat abacterial (kotak PCR). 3. Centrifuge / Vortex. 4. Dispenser otomatis volume variabel (dari 5 hingga 50 μl dan dari 20 hingga 200 μl). 5. Tips pakai dengan filter hingga 100 μl dan hingga 200 μl di tripod. 6. Tripod untuk 0,5 ml tabung atau 0,2 ml atau 0,1 ml (sesuai dengan jenis tabung yang digunakan). 7. Kulkas dari 2 hingga 8 С dengan freezer tidak lebih tinggi dari minus 16 С 8. Gaun ganti terpisah, topi, sepatu dan sarung tangan sekali pakai sesuai dengan MU Kapasitas untuk pembuangan ujung. Ketika melakukan reaksi transkripsi terbalik menggunakan "REVERET-L": 10. Tabung polypropylene sekali pakai dengan volume 0,2 ml atau 0,5 ml (tergantung pada model termostat atau penguat yang digunakan, di mana reaksi transkripsi terbalik dilakukan). 11. Thermostat untuk tabung jenis Eppendorf dari 25 hingga 100 C atau penguat yang dapat diprogram (misalnya, Terzik (Teknologi DNA, Rusia), Gradient Palm Cycler (Corbett Research, Australia), GeneAmp PCR System 2700 (Biosystem Terapan USA)). 12. Saat mengatur reaksi transkripsi terbalik kurang dari 10 mempelajari 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / p. 8 dari 32

9 sampel dispenser otomatis volume variabel (dari 0,5 hingga 10 μl). 13. Saat mengatur reaksi transkripsi terbalik untuk kurang dari 10 sampel yang dipelajari, kiat pakai dengan filter hingga 10 µl per tripod. Saat bekerja dengan "perangkat PCR": 14. Amplifier tipe rotari yang dapat diprogram (misalnya, Rotor-Gene 3000 atau 6000 (Corbett Research, Australia), Rotor-Gene Q (Qiagen, Jerman)), atau amplifier jenis tablet (misalnya, icycler iq5 (Bio-Rad, USA)), atau amplifier SmartCycler II (Cepheid, USA), atau Mx3000P, Mx3005P (Stratagene, USA) dan direkomendasikan oleh FBUN Central Research Institute of Epidemiology dari Rospotrebnadzor dalam rekomendasi metodologis tentang penggunaan kit reagen ini). 15. Tabung polypropylene sekali pakai untuk PCR: a) pipa berdinding tipis untuk PCR dengan volume 0,2 ml dengan tutup cembung (tidak teregang atau dilucuti) saat menggunakan perangkat tipe tablet; b) tabung PCR 0,2 ml berdinding tipis dengan tutup datar (tanpa tekanan) atau tabung strip dengan volume 0,1 ml menggunakan perangkat tipe rotari. c) 0,025 ml tabung PCR (Cepheid, USA) menggunakan perangkat SmartCycler II (Cepheid, USA). 16. Tripod berlabel (saat menggunakan perangkat jenis tablet). 17. Tabung polypropylene sekali pakai untuk PCR (topi datar, tidak standar) untuk 0,5 ml 18. Centrifuge dan rak tabung reaksi (Cepheid, USA) menggunakan SmartCycler II (Cepheid, USA). SAMBUNGAN, TRANSPORTASI, DAN PENYIMPANAN BAHAN DALAM STUDI Sebelum memulai bekerja, Anda harus membiasakan diri dengan pedoman metodologis “Mengambil, mengangkut, menyimpan bahan klinis untuk diagnostik PCR” yang dikembangkan oleh FGUN TsNIIE Rospotrebnadzor, Moskow, 2008. Untuk studi PCR, plasma darah tepi digunakan. Untuk mendapatkan plasma, darah diambil ke dalam tabung reaksi dengan larutan EDTA 3% dengan laju 20: 1 (20 bagian darah per 1 bagian EDTA). Putar tabung tes tertutup dengan darah beberapa kali. Dalam 6 jam sejak saat pengumpulan darah, plasma harus dikumpulkan dan dipindahkan ke tabung baru. Untuk melakukan hal ini, tabung dengan darah disentrifugasi selama 20 menit pada g, setelah plasma diambil dan dipindahkan ke 2x pakai terpisah (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / p. 9 dari 32

10 tabung reaksi. Plasma dapat disimpan tidak lebih dari 3 hari pada suhu 2 sampai 8 ° C dan untuk waktu yang lama pada suhu tidak lebih tinggi dari minus 68 C. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / p. 10 dari 32

11 FRT FORMAT FRT FORMAT KOMPOSISI Kit reagen RIBO-Sorb versi 50 kit reagen untuk isolasi RNA / DNA dari bahan klinis meliputi: Reagen Deskripsi Volume, ml Qty Solusi Lisis Solusi untuk mencuci 1 Solusi untuk mencuci 3 Solusi untuk mencuci, 5 1 vial vial 50 1 vial 20 1 vial Sorben White suspension 1.25 1 tube RNA buffer 0,5 5 tubes Kit reagen dirancang untuk mengisolasi RNA / DNA dari 50 sampel, termasuk kontrol. Termasuk dalam komposisi set lengkap 1 dan 4. kit Reibent "RIBO-persiapan" versi 50 kit reagen untuk isolasi RNA / DNA dari bahan klinis meliputi: Reagen Deskripsi Volume, ml Jumlah Solusi untuk lisis Solusi untuk pengendapan Solusi untuk mencuci 3 Solusi untuk mencuci 4 penyangga RNA Botol berwarna biru transparan 20 1 vial 25 1 vial 10 1 vial 1.2 4 tabung Kit reagen dirancang untuk isolasi RNA / DNA dari 50 sampel, termasuk kontrol. Termasuk dalam bentuk memilih 2 dan 5. Pilihan kit reagen Reverse-L 50 kit reagen untuk 3 Saat menyimpan larutan lisis, larutan lisis dan larutan pencuci 1 pada suhu 2 sampai 8 C, endapan dapat terbentuk dalam bentuk kristal. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 11 dari 32

12 FRT FORMAT untuk produksi cdna pada template RNA meliputi: RT-G-mix-1 RT-mix Revertase (MMlv) buffer DNA Reagen Keterangan Volume, ml Qty 0,01 5 tabung 0,125 5 tabung 0,03 1 tabung 1, 2 1 tabung Kit reagen versi 50 dirancang untuk melakukan 60 reaksi transkripsi balik, termasuk kontrol. Kit reagen “PCR kit” Versi FRT-g1-4 dari kit untuk amplifikasi PCR dari genotipe cdna (1a, 1b, 2, 3a, 4) dari HCV dengan deteksi hibridisasi waktu nyata meliputi: Campuran PCR-1- FRT HCV genotipe 1b / 3a PCR campuran-1-FRT HCV genotipe 1a / 2 PCR campuran-1-FRT HCV EKO / genotip 4 Reagen Deskripsi Volume, ml Hitung campuran RT-PCR-2-FEP / FRT Polymerase (TaqF) HCV cdna PKO genotipe 1b / 3a HCV cdna PKO genotipe 1a / 2 PKO cdna HCV CTP / genotipe 4 TE penyangga 0,6 1 tabung 0,6 1 tabung 0,6 1 tabung 0,3 3 tabung 0,03 3 tabung reaksi 0,2 1 tabung reaksi 0,2 1 tabung reaksi 0,2 1 tabung reaksi 0,5 1 tabung reaksi K Kit reagen dirancang untuk 55 tes (165 reaksi amplifikasi), termasuk kontrol. Termasuk dalam himpunan konfigurasi 1, 2 dan 3. Sampel pilihan dilampirkan ke kit reagen: 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 12 dari 32

13 FRT FORMAT Reagen Deskripsi Volume, ml Jumlah OKO VKO STI-248-rec 0,5 1 tabung 0,5 1 tabung Test kit "PCR kit" versi FRT-g1-6 kit untuk PCR amplifikasi genotipe cdna ( 1a, 1b, 2, 3a, 4, 5a, 6) HCV dengan deteksi hibridisasi-fluoresens real-time meliputi: Deskripsi Volume Reagen, ml Jumlah genotipe PCR campuran-1-FRT HCV 1b / 3a PCR mix- 1-FRT HCV genotipe 1a / 2 PCR-mix-1-FRT HCV VKO / genotipe 4 PCR-mix-1-FRT HCV genotipe 5a / 6 OT-PCR-mix-2-FEP / FRT Polimerase (TaqF) PKO cdna HCV genotipe 1b / 3a PKO cdna HCV genotipe 1a / 2 PKO cdna HCV EKO / genotipe 4 PKO cdn Genotipe HCV 5a / 6 TE-buffer 0.6 1 tabung reaksi 0.6 1 tabung reaksi 0.6 1 tabung reaksi 0.6 1 tabung reaksi 0.3 4 tabung reaksi 0.03 4 tabung reaksi 0.2 1 tabung reaksi 0.2 1 tabung reaksi 0, 2 1 tabung 0,2 1 tabung 0,5 1 tabung Kit reagen dirancang untuk 55 tes (220 reaksi amplifikasi), termasuk kontrol. Termasuk dalam set konfigurasi 4, 5 dan 6. Untuk kit reagen terpasang sampel kontrol dari tahap seleksi: 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 13 dari 32

14 FRT FORMAT REAGENT Deskripsi Volume, ml Jumlah OKO VKO STI-248-rec 0,5 1 tabung reaksi 0,5 1 tabung reaksi MENETAPKAN PENELITIAN PCR Penelitian PCR terdiri dari langkah-langkah berikut: Ekstraksi RNA dari sampel yang diteliti. Melakukan reaksi transkripsi terbalik. Amplifikasi dengan deteksi hibridisasi-fluoresens dalam mode "real time". Analisis dan interpretasi hasil. Informasi rinci tentang prosedur untuk melakukan penelitian PCR, tergantung pada jenis peralatan yang digunakan, ditetapkan dalam “Pedoman metodologi pada penggunaan kit reagen untuk menentukan dan membedakan genotipe virus hepatitis C (HCV) dalam bahan klinis menggunakan metode polymerase chain reaction (PCR) dengan deteksi hibridisasi-fluoresensi” AmpliSense HCV-genotype-FL ”, dikembangkan oleh FBUN Central Research Institute of Epidemiology of Rospotrebnadzor. EKSTRAKSI RNA DARI PERCOBAAN SAMPEL YANG DIAJUKAN! Saat bekerja dengan RNA, Anda hanya perlu menggunakan bahan habis pakai plastik sekali pakai dengan tanda khusus "RNasefree", "DNase-free". Untuk ekstraksi RNA, kit reagen yang direkomendasikan oleh FBUN TsNII Epidemiologi dari Rospotrebnadzor digunakan: menggunakan kit reagen RIBO-sorb, lihat prosedur dalam Lampiran 1 "Ekstraksi RNA menggunakan kit reagen RIBO-sorb". ketika menggunakan kit reagen RIBO-persiapan, lihat prosedur di Lampiran 2 "Ekstraksi RNA menggunakan kit reagen RIBO-persiapan". PERHATIAN! Persiapan RNA yang dihasilkan tidak tunduk pada penyimpanan, reaksinya adalah reverse 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / p. 14 dari 32

15 FORT FRT transkripsi harus dilakukan segera setelah menerima probe RNA. MELAKUKAN REAKSI TRANSKRIPSI REVERSE Total volume campuran reaksi adalah 20 μl, termasuk volume sampel RNA 10 μl. PERHATIAN! Saat bekerja dengan RNA, Anda hanya perlu menggunakan bahan habis pakai plastik sekali pakai dengan tanda khusus "RNasefree", "DNase-free". A. Persiapan tabung untuk transkripsi terbalik Untuk memasukkan reagen dan sampel RNA ke dalam tabung, ujung pakai dengan filter digunakan. PERHATIAN! Komponen-komponen campuran reaksi harus dicampur segera sebelum reaksi transkripsi balik. 1. Sebelum mulai bekerja, defrost, aduk rata di vortex RT-mix dan RT-G-mix-1. Tiriskan tetesan dari tutup tabung uji. 2. Pilih jumlah tabung yang diperlukan dengan volume 0,2 atau 0,5 ml (tergantung pada model termostat atau penguat yang digunakan) untuk reaksi transkripsi terbalik, dengan mempertimbangkan jumlah sampel uji dan kontrol (satu kontrol ekstraksi (OK)). Beri label pada tabung. 3. Saat melakukan reverse transcription of samples: a) Persiapkan campuran reaksi untuk 12 reaksi. Untuk melakukan ini, tambahkan 5 μl RT-G-mix-1 ke tabung dengan RT-mix, aduk rata pada pusaran dan tetes presipitat dari tutup tabung. b) Tambahkan 6 µl of revertase (MMlv) ke solusi yang dihasilkan, pipet 5 kali, campurkan pada vortex. Tiriskan tetesan dari tutup tabung dengan sentrifugasi singkat. 4. Ketika melakukan reverse transkripsi kurang dari 10 sampel: Untuk menyiapkan campuran reaksi, perlu mencampur reagen per 1 reaksi dalam urutan berikut dalam urutan berikut: 10 μl RT-mix, 0,4 μl RT-G-mix-1 dan 0, 5 ml revertase (MMlv) (lihat juga Tabel. 1). Ketika ditambahkan ke campuran RT-G-mix-1 dan revertase (MMlv), pipet setiap reagen setidaknya 5 kali. Campur adonan secara menyeluruh pada pusaran dan endapkan tetesan dari tutup tabung. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 15 dari 32

16 FRT FORMAT PERHATIAN! Revertase (MMlv) sensitif terhadap panas! Jangan biarkan di suhu kamar untuk waktu yang lama! Segera setelah digunakan, masukkan kulkas ke dalam freezer! Jumlah reagen per reaksi (μl) Jumlah sampel klinis Skema persiapan campuran reaksi 10.00 0.4 0.5 RT-mix RT-G-mix-1 Revertase (MMlv), 4 3,, 8 3,, 2 4,, 6 4,, 0 5.0 5. Tambahkan 10 μl campuran reaksi disiapkan ke tabung disiapkan. Tabel 1 6. Tambahkan 10 µl sampel RNA yang diisolasi dari sampel klinis dan kontrol ke tabung jadi sesuai dengan label. Vortex dengan lembut dan endapan turun dari tutup botol. PERHATIAN! Ketika menambahkan sampel RNA diisolasi menggunakan kit reagen RIBO-sorb, perlu untuk menghindari masuknya sorben ke dalam campuran reaksi. B. Melaksanakan reaksi transkripsi terbalik 1. Tempatkan tabung dalam penguat (termostat) pada 37 ° C selama 30 menit. PERHATIAN! Dalam kasus menggunakan amplifier dengan sistem pendeteksian "real-time" untuk transkripsi terbalik, penting untuk memprogram perangkat untuk melakukan program yang sesuai (lihat Tabel 2 dan "Pedoman penggunaan kit reagen untuk mendeteksi dan membedakan genotipe virus hepatitis C (HCV)) dalam bahan klinis dengan metode polymerase chain reaction (PCR) dengan deteksi hibridisasi-fluoresensi "AmpliSense HCV-genotype-FL" ", yang dikembangkan oleh FBUN Central Research Institute of Epidemiology Rospotrebnadzor). Tabel 2 4 Volume reagen yang diperkenalkan diberikan dengan mempertimbangkan jumlah sampel yang diteliti (sampel klinis dan 1 kontrol tahap ekstraksi RNA) dan cadangan per 1 sampel. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 16 dari 32

17 FRT FORMAT Program untuk melaksanakan reaksi transkripsi terbalik untuk amplifier dengan sistem pendeteksian real-time 5 Suhu Langkah, C Durasi langkah Pengukuran fluoresensi Jumlah siklus min 1 2. Setelah akhir reaksi, tambahkan 20 µl buffer DNA ke tabung menggunakan yang baru tip filter untuk setiap sampel. Campur dengan lembut pada pusaran dan endapan tetes dari tutup botol. CDna yang diperoleh dalam reaksi transkripsi terbalik digunakan untuk amplifikasi PCR. Persiapan cdna selesai dapat disimpan pada suhu tidak lebih tinggi dari minus 16 С selama 1 minggu atau pada suhu tidak lebih tinggi dari minus 68 С selama setahun. MELAKUKAN AMPLIFIKASI DENGAN DETEKSI DALAM MODE REAL-TIME A. Persiapan Tabung Amplifikasi Pemilihan tabung untuk amplifikasi tergantung pada penguat yang digunakan. Untuk memasukkan reagen, sampel cdna dan sampel kontrol ke dalam tabung reaksi, tip pakai dengan filter digunakan. Total volume campuran reaksi adalah 25 μl, termasuk volume sampel cdna 10 μl. PERHATIAN! Komponen campuran reaksi harus dicampur segera sebelum melakukan penelitian PCR. Pencampuran reagen berdasarkan jumlah reaksi yang diperlukan, termasuk pengujian sampel uji dan kontrol, diperlukan sesuai dengan tabel perhitungan (lihat Tabel 3, 4). A1. Persiapan tabung amplifikasi menggunakan kit PCR, versi FRT-g1-4 5 Sebagai contoh, Rotor-Gene 3000 atau 6000 (Corbett Research, Australia); Rotor-Gene Q (Qiagen, Jerman); iq5 (Bio-Rad, Amerika Serikat); Mx3000P (Stratagene, Amerika Serikat); "DT-96" ("DNA-teknologi", Rusia) dan direkomendasikan oleh FBUN Central Research Institute of Epidemiology of Rospotrebnadzor dalam pedoman untuk penggunaan kit reagen ini. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 17 dari 32

18 FRT FORMAT 1. Sebelum memulai pekerjaan, defrost, vortex secara menyeluruh semua kit reagen dan endapan turun dari tutup tabung uji. 2. Pilih jumlah amplifikasi tabung yang dibutuhkan, dengan mempertimbangkan jumlah sampel uji dan kontrol (satu kontrol ekstraksi RNA, dua kontrol amplifikasi). Jenis tabung untuk dipilih tergantung pada perangkat yang digunakan. PERHATIAN! Setiap sampel dianalisis menggunakan tiga campuran reaksi, jadi untuk setiap sampel perlu menyiapkan 3 tabung. Saat menggunakan perangkat tipe putar, tandai tabung "sample_1b / 3a", "sample_1a / 2" dan "sample_vko / 4", masing-masing. Saat menggunakan perangkat jenis tablet, gunakan tripod bertanda untuk tujuan ini. 3. Pilih tiga tabung 0,5 ml untuk persiapan campuran reaksi. Label tabung "1b / 3a", "1a / 2" dan "VKO / 4". 4. Untuk masing-masing dari tiga tabung yang ditujukan untuk persiapan campuran reaksi, tambahkan hingga 1 reaksi: 5 μl campuran RT-PCR-2-FEP / FRT, 0,5 μl polimerase (TaqF) dan 10 μl campuran PCR yang sesuai. Genotipe HCV -1-FRT (lihat juga Tabel 3), campuran PCR-1-FRT genotipe HCV 1b / 3a dimasukkan ke dalam tabung “1b / 3a”, dll. Campur campuran reaksi yang dihasilkan pada pusaran dan tetes presipitat dari tutup botol. PERHATIAN! Campuran reaksi harus disiapkan dengan margin 1 sampel (lihat Tabel 3). 5. Tambahkan ke tabung yang dimaksudkan untuk amplifikasi, 15 μl campuran reaksi akhir sesuai dengan label, yaitu. campuran reaksi "1b / 3a" dimasukkan ke dalam tabung uji berlabel "sample_1b / 3a", dll. 6. Tambahkan 10 µl cdna-sampel yang diperoleh dalam reaksi transkripsi balik ke tabung reaksi yang disiapkan dengan campuran reaksi terdispersi sesuai dengan penandaan, dan setiap sampel, termasuk kontrol ekstraksi negatif (OK), harus ditambahkan ke 3 tabung yang berisi tabung reaksi yang tersebar. campuran "1b / 3a", "1a / 2" dan "VKO / 4". 7. Masukan reaksi kontrol: a) Tambahkan kontrol negatif PCR (K) ke tabung reaksi dengan campuran reaksi 1b / 3a, 1a / 2 dan BKO / 4 dari 10 µl TE buffer. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 18 dari 32

19 FRT FORMAT b) kontrol positif PCR (K + 1b / 3a) dalam tabung dengan campuran reaksi “1b / 3a”, tambahkan 10 μl genotipe OTP cdna HCV 1b / 3a; c) kontrol positif PCR (K + 1a / 2) dalam tabung dengan campuran reaksi “1a / 2” tambahkan 10 μl genotipe OTP cdna HCV 1a / 2; d) kontrol positif PCR (K + VKO / 4) dalam tabung reaksi dengan campuran reaksi VKO / 4. Tambahkan 10 µl PKO cdna HCV EKO / genotipe 4. Skema persiapan campuran reaksi untuk varian FRT Reagen volume per reaksi (µl) Nomor Nomor sampel penelitian klinis poin 6 10.00 5.00 0.50 6 Jumlah sampel klinis + 1 kontrol fase ekstraksi RNA + 2 kontrol PCR (N + 3, N jumlah sampel klinis). PCR campuran-1-FRT HCV genotipe * RT-PCR mix-2-FEP / FRT * Tabel 3 Polymerase (TaqF) *,,,,,,,,, 0 * Volume pereaksi diterapkan diberikan dengan margin 1 sampel. A2. Persiapan tabung amplifikasi menggunakan versi kit reagen "PCR kit" FRT-g Sebelum memulai bekerja, mencair, benar-benar mencampur semua reagen kit pada vortex dan endapan tetesan dari tutup tabung. 2. Pilih jumlah amplifikasi tabung yang dibutuhkan, dengan mempertimbangkan jumlah sampel uji dan kontrol (satu kontrol ekstraksi RNA, dua kontrol amplifikasi). Jenis tabung untuk dipilih tergantung pada perangkat yang digunakan. PERHATIAN! Setiap sampel dianalisis menggunakan empat campuran reaksi, jadi untuk setiap sampel perlu menyiapkan 4 tabung. Ketika menggunakan tabung dengan volume 0,2 ml untuk instrumen jenis rotor, tandai tabung "spesimen_1b / 3a", "spesimen_1a / 2", "spesimen_vko / 4" dan "spesimen_5a / 6", masing-masing. Saat menggunakan perangkat jenis tablet atau saat menggunakan 2x bergaris (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 19 dari 32

20 tabung FRT FORMAT untuk instrumen tipe-putar menggunakan tripod bertanda untuk tujuan ini. 3. Pilih empat tabung 0,5 ml untuk persiapan campuran reaksi. Label tabung "1b / 3a", "1a / 2", "VKO / 4" dan "5a / 6". 4. Untuk masing-masing dari empat tabung yang ditujukan untuk persiapan campuran reaksi, tambahkan hingga 1 reaksi: 5 μl campuran RT-PCR-2- genotipe FRT HCV (lihat juga Tabel 4), dengan campuran PCR-1- Genotipe HCT FRT 1b / 3a dimasukkan ke dalam tabung “1b / 3a”, dll. Campur campuran reaksi yang dihasilkan pada pusaran dan tetes presipitat dari tutup botol. Skema untuk persiapan campuran reaksi untuk varian FRT Volume reagen per reaksi (μL) Jumlah Jumlah titik uji klinis poin 7 10.00 5.00 0,50 FEP / FRT, 0,5 μl polimerase (TaqF) dan 10 μl campuran PCR yang sesuai -1- PCR campuran-1-FRT HCV genotipe * RT-PCR campuran-2- FEP / FRT * Tabel 4 Polymerase (TaqF) *,,,,,,,,, 0 * jumlah pereaksi ditambahkan diberikan dengan margin 1 sampel. 5. Tambahkan ke tabung yang dimaksudkan untuk amplifikasi, 15 μl campuran reaksi akhir sesuai dengan label, yaitu. campuran reaksi "1b / 3a" dimasukkan ke dalam tabung uji berlabel "sample_1b / 3a", dll. Dalam hal menggunakan untuk reaksi amplifikasi tabung bergaris, campuran reaksi harus diperkenalkan sesuai dengan skema yang ditunjukkan pada Gambar 1. 7 Jumlah sampel klinis + 1 kontrol tahap ekstraksi RNA + 2 kontrol PCR (N + 3, N jumlah sampel klinis). 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 20 dari 32

21 FRT FORMAT 4 tabung digunakan untuk produksi sampel klinis tunggal Campuran "1b / 3a" Campuran "1a / 2" Campuran "VKO / 4" Campuran "5a / 6" Campuran "1b / 3a" Campuran "1a / 2" Campuran BKO / 4 ”Campuran“ 5а / 6 ”Gambar 1. Skema untuk memperkenalkan campuran reaksi dan sampel saat menggunakan tabung strip untuk PCR. 6. Tambahkan 10 µl cdna-sampel yang diperoleh dalam reaksi transkripsi balik ke tabung reaksi yang disiapkan dengan campuran reaksi terdispersi sesuai dengan penandaan, dan setiap sampel, termasuk kontrol ekstraksi negatif (OK), harus ditambahkan ke 4 tabung yang berisi reaksi yang tersebar campuran "1b / 3a", "1a / 2", "VKO / 4" dan "5a / 6". 7. Masukan reaksi kontrol: a) tambahkan kontrol negatif PCR (K) ke tabung reaksi dengan campuran reaksi 1b / 3a, 1a / 2, VKO / 4 dan 4a / 6a 10 μl TE-buffer reaksi. b) kontrol positif PCR (K + 1b / 3a) dalam tabung dengan campuran reaksi "1b / 3a" tambahkan 10 μl genotipe OTP cdna HCV 1b / 3a; c) kontrol positif PCR (K + 1a / 2) dalam tabung dengan campuran reaksi “1a / 2” tambahkan 10 μl genotipe OTP cdna HCV 1a / 2; d) kontrol positif PCR (K + VKO / 4) dalam tabung reaksi dengan campuran reaksi VKO / 4, tambahkan 10 µl PKO cdna HCV VKO / genotipe 4; e) kontrol positif PCR (K + 5a / 6) dalam tabung dengan campuran reaksi "5a / 6", tambahkan 10 μl genotipe OTP cdna HCV 5a / 6. B. Melakukan amplifikasi dengan deteksi dalam mode “waktu nyata” 1. Program instrumen (amplifier dengan sistem deteksi dalam mode “waktu nyata”) untuk menjalankan program amplifikasi yang sesuai dan mendeteksi sinyal fluoresensi “AmpliSens-1” (lihat Tabel 5, 6). ). Tabel 5 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / p. 21 dari 32

22 FRT FORMAT Program Amplisens-1 untuk perangkat tipe rotari 8 Suhu, Pengukuran Durasi Kuantitas Tahap C tahap fluoresensi siklus Hold / Hold min 1 Temperatur 95 5 s Bersepeda / s 5 Bersepeda 95 5 s Bersepeda 2 / FAM / Hijau, s 40 Cycle 2 JOE / Yellow s Tabel 6 Program AmpliSens-1 untuk perangkat tipe tablet 9 dan Smart Cycler II (Cepheid, USA) Langkah Temperatur, Pengukuran Durasi Nomor C tahap fluoresensi siklus min (900 s 10 dtk) s 95 5 detik dengan FAM, JOE / HEX / Cy dengan 2. Pasang tabung di sel dari modul reaksi perangkat. 3. Mulai pelaksanaan program amplifikasi dengan deteksi sinyal fluoresensi. 4. Pada akhir program, lanjutkan dengan analisis dan interpretasi hasil. ANALISIS DAN INTERPRETASI HASIL Analisis hasil dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak yang digunakan oleh instrumen untuk deteksi PCR c dalam "real time". Kurva akumulasi sinyal fluoresen dianalisis untuk saluran untuk fluorophore FAM (atau serupa) dan saluran untuk JOE fluorophore (atau serupa). Hasilnya ditafsirkan berdasarkan keberadaan (atau ketiadaan) 8 Misalnya, Rotor-Gene 3000 atau 6000 (Corbett Research, Australia), Rotor-Gene Q (Qiagen, Jerman). 9 Misalnya, icycler iq5 (Bio-Rad, USA); Mx3000P, Mx3005 (Stratagene, Amerika Serikat); "DT-96" ("DNA-Teknologi", Rusia) dan direkomendasikan oleh FBUN Central Research Institute of Epidemiology dari Rospotrebnadzor dalam pedoman untuk penggunaan kit reagen ini. 10 Untuk perangkat Smart Cycler II (Cepheid, USA). 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 22 dari 32

FORMAT FRT dari perpotongan kurva fluoresensi dengan garis batas yang ditetapkan pada tingkat yang sesuai menentukan keberadaan (atau ketiadaan) untuk contoh cdna ini dari nilai siklus ambang Ct dalam grafik yang sesuai dalam tabel hasil. Hasil amplifikasi saluran dianggap positif jika kurva fluoresensi memiliki tampilan S-bentuk khas untuk PCR real-time, setelah disilangkan dengan garis batas di wilayah gain fluoresensi yang signifikan, negatif jika tidak ada kurva khas dan tidak ada persimpangan dengan garis batas (tidak ada nilai Ct atau Cp) dan diragukan dalam semua kasus lainnya. Tabel 7 menunjukkan saluran di mana genotipe HCV dideteksi untuk setiap campuran reaksi. Tabel 7 Campuran reaksi “1b / 3a” “1a / 2” “VKO / 4” “5a / 6 11” Saluran Genotipe yang dapat dideteksi HCV FAM / Hijau 1b 1a VKO 5a JOE / HEX / Kuning / Cy3 3a Pencatatan hasil pada sampel kontrol Hasil Studi PCR dianggap dapat diandalkan jika hasil yang benar diperoleh untuk melewati sampel kontrol sesuai dengan tabel evaluasi hasil reaksi kontrol (lihat Tabel 8). 11 Termasuk dalam PCR kit adalah varian FRT-g1-6. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 23 dari 32

24 FRT FORMAT Campuran reaksi Kontrol OK K K + 1b / 3a Hasil untuk kontrol berbagai tahapan uji PCR Nilai FAM / Green No Ct Nilai Hilang Ct Di bawah nilai batas Tabel 8 “1b / 3a” “1a / 2” “BKO / 4 »" 5a / 6 "12 Hasil amplifikasi oleh JOE / HEX / Yellow / Cy3 channel FAM / Hijau JOE / HEX / Kuning / Cy3 FAM / Hijau JOE / HEX / Kuning / Cy3 FAM / Hijau JOE / HEX / Kuning / Cy3 Hilang nilai Ct Hilang nilai Ct Di bawah nilai batas K + 1a / 2 * * Hilang nilai Ct Hilang nilai Ct Hilang nilai Ct Hilang Ct nilai Di bawah nilai batas Hilang Ct nilai Hilang Nilai Ct hilang Nilai Ct hilang Nilai Ct hilang Nilai Ct hilang Nilai Ct hilang Nilai Ct hilang * * * * * * Di bawah nilai batas Di bawah nilai batas K + Vko / 4 * * * * * * * * Di bawah nilai batas Di bawah nilai ambang K + 5a / 6 * * * * * * * Campuran reaksi ini tidak diuji. * * Di bawah nilai batas PERHATIAN! Nilai batas Ct ditunjukkan di insert ke PCR kit. Pencatatan hasil dalam sampel klinis yang diteliti Di bawah nilai batas 1. Genotipe HCV yang ada dalam sampel ini ditetapkan dengan membandingkan hasil amplifikasi dalam tiga (untuk kit PCR, varian FRT-g1-4) atau empat tabung (untuk kit PCR). opsi FRT-g1-6) sesuai dengan tabel. 7, apalagi: a) Jika nilai Ct untuk sampel ditentukan untuk sampel, sesuai dengan genotipe RNA HCV tunggal, hasilnya adalah “Genotipe”; b) Jika dua atau lebih nilai Ct ditentukan untuk sampel dalam tabel hasil, maka double, triple, dll., genotipe dikeluarkan. Pengecualian adalah kasus berikut: jika nilai Ct ditentukan untuk sampel pada campuran reaksi VKO / 4 melalui saluran JOE / HEX / Yellow / Cy3 (4 genotipe HCV) dan pada campuran reaksi 1b / 3a pada saluran FAM / Hijau (1b) HCV), dan nilai Ct untuk genotipe ke-4 lebih dari 10 nilai Ct untuk genotipe pertama dengan 10 siklus atau lebih, kemudian 12 varian FRT-g1-6 disertakan dalam kit PCR. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 24 dari 32

25 FRT FORMAT adalah hasil dari "Genotype 4". 2. Jika dalam tabel hasil untuk sampel, nilai Ct hanya ditentukan untuk CTP (reaksi CTP / 4, saluran FAM / Hijau) dan itu di bawah nilai batas yang ditunjukkan dalam sisipan, hasilnya adalah “Genotipe HCV tidak ditentukan”. Selain itu, jika diketahui bahwa konsentrasi RNA HCV dalam sampel ini berada dalam sensitivitas analitis dari reagen reagen, hasilnya diberikan “Genotipe HCV tidak ditentukan karena viral load yang rendah”. 3. Jika hasil Ct untuk semua genotipe tidak ada dalam tabel hasil untuk sampel, dan nilai Ct untuk ASD (melalui saluran FAM pada campuran PCV-1-FRT HCV EKO / genotipe 4) tidak didefinisikan atau melebihi batas (ditunjukkan dalam sisipan), Ini diperlukan untuk mengulang studi PCR dari sampel ini, mulai dari tahap ekstraksi RNA. PERHATIAN! 1. Jika nilai Ct setidaknya satu sampel dengan kontrol positif dari tahap PCR (K + 1b / 3a, K + 1a / 2, K + VKO / 4 atau K + 5a / 6) melebihi nilai batas yang ditentukan dalam insert atau tidak ada, maka perlu ulangi uji PCR untuk semua sampel, mulai dari langkah ekstraksi. 2. Jika untuk kontrol negatif ekstraksi RNA (OC) setidaknya pada salah satu campuran reaksi "1b / 3a", "1a / 2", "5a / 6" sepanjang saluran yang digunakan dan / atau pada campuran reaksi "VKO / 4" “Sinyal positif terdeteksi pada saluran JOE / HEX / Yellow / Cy3, perlu untuk mengulang penelitian PCR untuk semua sampel yang genotipe HCVnya ditentukan dalam campuran reaksi ini, dimulai dari langkah ekstraksi RNA. 3. Jika untuk kontrol PCR negatif (K) sinyal positif terdeteksi pada campuran reaksi apa pun di sepanjang saluran mana pun, perlu untuk mengulangi penelitian PCR untuk semua sampel yang genotipe HCVnya ditentukan dalam campuran reaksi ini, dimulai dari langkah ekstraksi RNA. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 25 dari 32

26 KEHIDUPAN PENYIMPANAN, KONDISI TRANSPORTASI DAN PENYIMPANAN Tanggal kedaluwarsa. 12 bulan Kit reagen yang kedaluwarsa tidak berlaku. Umur simpan dari reagen yang terbuka berhubungan dengan umur simpan yang ditunjukkan pada label untuk pereaksi yang belum dibuka, kecuali dinyatakan lain dalam instruksi. Transportasi Satu set reagen harus diangkut pada suhu dari 2 hingga 8 ° C selama tidak lebih dari 5 hari. Setelah diterima, bongkar sesuai dengan suhu penyimpanan yang ditentukan. Penyimpanan Menyimpan kit reagen “RIBO-sorb” dan “RIBO-prep” pada suhu 2 hingga 8 ° C. kit reagen REVERTA-L dan “PCR kit”, dengan pengecualian OKO, TE-buffer dan CTP STI-248-rec disimpan pada suhu tidak lebih tinggi dari minus 16 ° C. EYE, TE-buffer dan CTP STI-248-rec dari "PCR kit" harus disimpan pada suhu 2 sampai 8 ° C. PCR campuran-1-FRT HCV genotipe 1b / 3a, HCV PCR campuran-1-FRT genotipe 1a / 2, HCV BKO / genotipe PCR campuran-1-FRT HCV / genotipe 4 dan PCR campuran-1-FRT HCV genotipe 5a / 6 harus disimpan di tempat gelap. Kondisi liburan. Untuk lembaga pengobatan dan profilaksis dan sanitasi. Keluhan pada kualitas kit reagen AmpliSense HCV-genotipe-FL harus dikirim ke pabrik manufaktur Lembaga Penelitian dan Pengembangan Federal dari Epidemiologi Rospotrebnadzor (Moscow, Novogireevskaya St., 3a) di departemen untuk reklamasi dan pelatihan ("495), faks (495), Anda dapat meninggalkan ulasan dan saran tentang produk AmpliSense dengan mengisi profil konsumen di situs web: 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / p. 26 dari 32

27 EKSTRAKSI RNA LAMPIRAN 1. Ekstraksi RNA dengan menggunakan kit reagen RIBO-sorb Prosedur 1. Larutan lisis dan larutan pencuci 1 (jika disimpan pada 2 sampai 8 ° C), dipanaskan pada 60 ° C sampai kristal-kristal dilarutkan sepenuhnya. 2. Pilih jumlah yang diperlukan tabung sekali pakai 1,5 ml (termasuk kontrol ekstraksi negatif). Beri label pada tabung. 3. Di bagian bawah setiap tabung, buat 10 µl CTP STI-248-rec. 4. Tambahkan 450 µl larutan lisis ke tabung. Beri label pada tabung. Catatan Dengan volume besar sampel untuk memfasilitasi prosedur seleksi, itu diperbolehkan untuk mencampur dalam botol terpisah larutan litik dan CTP STI-248-rec (per sampel, 450 ml larutan lisis dan 10 μl CTP STI-248-rec) diikuti dengan pemisahan 450 μl campuran dalam tabung pra-siap 1,5 ml. 5. Dalam tabung reaksi dengan larutan lisis dan ASD, buat 100 µl masing-masing sampel menggunakan tip dengan filter. Dalam tabung reaksi kontrol negatif (OK), tambahkan 100 μl Kontrol Negatif. 6. Sampel yang tertutup rapat harus dicampur secara menyeluruh pada vortex dan disentrifugasi selama 5 detik pada 5 ribu rpm dalam microcentrifuge untuk menghilangkan tetesan dari permukaan bagian dalam tutup tabung. 7. Resuspend sorben dengan vortexing dengan penuh semangat. Tambahkan 25 µl sorben yang disemprot kembali ke setiap tabung dengan ujung terpisah. 8. Aduk isi tabung pada pusaran dan biarkan selama 10 menit pada suhu kamar, aduk rata setiap 2 menit. 9. Centrifuge tabung microcentrifuge pada 7 ribu g (misalnya, 10 ribu rpm untuk MiniSpin, Eppendorf centrifuge) selama 1 menit. 10. Hapus supernatan dari setiap tabung dengan ujung terpisah menggunakan aspirator vakum. 11. Tambahkan 400 ml larutan pencuci ke dalam tabung 1. Vortex sampai sorben benar-benar diresuspensi. Centrifuge tabung dalam microcentrifuge di 7 ribu g selama 1 menit. Pilih 2x supernatan (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 27 dari 32

28 RNA EKSTRAKSI dari setiap tabung dengan ujung terpisah menggunakan aspirator vakum. 12. Tambahkan 500 µl larutan pencuci ke dalam tabung 3. Vortex sampai sorben benar-benar diresuspensi. Centrifuge tabung dalam microcentrifuge di 7 ribu g selama 1 menit. Hapus larutan pencuci 3 dari setiap tabung dengan ujung terpisah menggunakan aspirator vakum. 13. Tambahkan 400 µl larutan pencuci ke dalam tabung 4. Vortex hingga sorben benar-benar diresuspensi. Centrifuge tabung dalam microcentrifuge di 7 ribu g selama 1 menit. Pilih penuh larutan pencuci 4 dari setiap tabung dengan ujung terpisah menggunakan aspirator vakum. 14. Keringkan sorben dengan menempatkan tabung dengan tutup terbuka dalam termostat pada 60 C selama 15 menit. 15. Resuspend sorben dalam 50 μl buffer RNA. Panaskan dalam termostat pada 60 C selama 2 menit, campurkan pada pusaran dan endapkan sorben dalam centrifuge pada 12.000 g (misalnya, rpm untuk MiniSpin, Eppendorf centrifuge) selama 1 menit. PERHATIAN! Persiapan RNA yang dihasilkan tidak dapat disimpan, reaksi transkripsi balik harus dilakukan segera setelah menerima sampel RNA. Anda perlu memilih solusi RNA untuk reaksi dengan sangat hati-hati, tanpa menangkap sorben. Jika sorben terganggu, perlu untuk mengendapkannya dalam centrifuge. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 28 dari 32

29 RNA EKSTRAKSI LAMPIRAN 2. Ekstraksi RNA menggunakan kit reagen RIBO-persiapan Prosedur 1. Larutan Lisis (jika disimpan pada suhu 2 sampai 8 ° C) dipanaskan pada suhu hingga 65 ° C sampai pelarutan sempurna dari kristal. 2. Pilih jumlah yang diperlukan 1,5 ml tabung sekali pakai (termasuk kontrol ekstraksi negatif dan positif). 3. Di bagian bawah setiap tabung, buat 10 µl CTP STI-248-rec. 4. Tambahkan 300 µl larutan lisis ke tabung. Beri label pada tabung. Catatan Dengan volume besar sampel untuk memfasilitasi prosedur alokasi, diperbolehkan untuk mencampur dalam botol terpisah larutan lisis dan CTP STI-248-rec (per µl sampel, 300 μl larutan untuk lisis dan 10 µl CTP STI-248-rec), diikuti oleh 300 µl campuran ke dalam tabung 1,5 ml yang disiapkan sebelumnya. 5. Dalam tabung reaksi dengan larutan untuk lisis dan EKR, tambahkan 100 µl setiap sampel menggunakan tip dengan filter. Dalam tabung reaksi kontrol negatif (OK), tambahkan 100 μl Kontrol Negatif. 6. Vortex isi tabung, centrifuge selama 5 detik dalam microcentrifuge untuk menghilangkan tetesan dari permukaan bagian dalam tutup dan panas selama 5 menit pada 65 ° C dalam termostat. 7. Tambahkan 400 µl larutan pengendapan ke tabung, aduk rata pada pusaran. 8. Centrifuge tabung microcentrifuge pada 12.000 g (misalnya, rpm untuk MiniSpin, Eppendorf centrifuge) selama 5 menit. 9. Keluarkan supernatan dengan hati-hati, tanpa menyentuh sedimen, menggunakan perangkat hisap vakum dan tip terpisah untuk setiap sampel. 10. Tambahkan 500 µl larutan pencuci ke tabung 3, tutup rapat dengan rapat, bilas dengan hati-hati, balik tabung 3-5 kali. Adalah mungkin untuk melakukan prosedur secara bersamaan untuk semua tabung, untuk ini perlu untuk menutupi tabung di rak dengan penutup atau tripod lain di atas, tekan mereka dan putar tripod. 11. Centrifuge pada 12 ribu g selama 1-2 menit dalam microcentrifuge. 12. Hati-hati, tanpa menangkap sedimen, pilih supernatan, 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 29 dari 32

30 RNA EKSTRAKSI menggunakan aspirator vakum dan tip terpisah untuk setiap sampel. 13. Tambahkan ke tabung 200 µl larutan pencuci 4, tutup rapat dan bilas dengan hati-hati presipitat, putar tabung 3-5 kali. Adalah mungkin untuk melakukan prosedur secara bersamaan untuk semua tabung, untuk ini perlu untuk menutupi tabung di rak dengan penutup atau tripod lain di atas, tekan mereka dan putar tripod. 14. Centrifuge pada 12 ribu g selama 2 menit dalam microcentrifuge. 15. Dengan hati-hati, tanpa menangkap endapan, pilih secara hati-hati supernatan menggunakan aspirator vakum dan tip terpisah untuk setiap sampel. 16. Tempatkan tabung dalam termostat pada 65 C selama 5 menit untuk mengeringkan endapan (tutup tabung harus dibuka). 17. Tambahkan 50 µl buffer RNA ke tabung. Aduk pusarannya. Tempatkan di termostat pada 65 ° C selama 5 menit, gemetar sesekali pada pusaran. 18. Centrifuge tabung pada 12 ribu g selama 1 menit dalam microcentrifuge. Supernatan mengandung RNA murni. Sampel siap untuk formulasi reaksi transkripsi terbalik dan PCR. PERHATIAN! Persiapan RNA yang dihasilkan tidak dapat disimpan, reaksi transkripsi balik harus dilakukan segera setelah menerima sampel RNA. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 30 dari 32

31 SIMBOL YANG DIGUNAKAN DALAM PRINTED PRODUCT Catalog number Batch code Perhatian! Rujuk ke dokumentasi yang menyertainya Jumlah tes maksimum Produk untuk diagnostik in vitro Gunakan hingga Tanggal perubahan Batas suhu Batas suhu atas Rujuk ke instruksi manual Hindari sinar matahari langsung Tanggal pembuatan Produsen 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / p. 31 dari 32

32 Rev. LA IvI Dimana membuat perubahan Footer Footer Daftar perubahan Esensi dari perubahan Menambahkan nomor katalog R-V1-G (1-4) - 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) untuk konfigurasi bentuk 3 Nomor katalog yang dihapus untuk bentuk konfigurasi 1 dan 4 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / halaman 32 dari 32

Amplisens hcv fl

Tahapan hepatitis c
Harga Mpiviropack

Semua tentang Hepatitis C

Perawatan, gejala, obat-obatan

Hepatitis dengan rna amplicens hcv fl

Hepatitis dengan rna amplicens hcv fl

Hepatitis adalah penyakit radang akut dan kronis pada hati, bukan fokal, tetapi meluas. Pada hepatitis yang berbeda, metode infeksi berbeda, mereka juga berbeda dalam tingkat perkembangan penyakit, manifestasi klinis, metode dan prognosis terapi. Bahkan gejala berbagai tipe hepatitis berbeda. Selain itu, beberapa gejala muncul lebih kuat daripada yang lain, yang ditentukan oleh jenis hepatitis.

Gejala utama

  1. Kekuningan Gejala ini umum dan karena fakta bahwa bilirubin memasuki darah pasien dalam kasus kerusakan hati. Darah, yang mengalir ke seluruh tubuh, menyebar melalui organ dan jaringan, melukisnya kuning.
  2. Munculnya rasa sakit di hipokondrium kanan. Ini terjadi karena peningkatan ukuran hati, yang menyebabkan munculnya rasa sakit, yang kusam dan berkepanjangan atau bersifat paroksismal.
  3. Kerusakan kesehatan, disertai demam, sakit kepala, pusing, gangguan pencernaan, mengantuk dan lesu. Semua ini merupakan konsekuensi dari tindakan pada tubuh bilirubin.

Hepatitis akut dan kronis

Pasien hepatitis memiliki bentuk akut dan kronis. Dalam bentuk akut, mereka menampakkan diri dalam kasus kerusakan virus hati, dan juga jika ada keracunan oleh berbagai jenis racun. Dalam bentuk akut penyakit, kondisi pasien memburuk dengan cepat, yang berkontribusi terhadap perkembangan gejala yang dipercepat.

Dengan bentuk penyakit ini sangat memungkinkan proyeksi yang menguntungkan. Dengan pengecualian menjadi kronis. Dalam bentuk akut, penyakit ini mudah didiagnosis dan lebih mudah diobati. Hepatitis akut yang tidak diobati dengan mudah berkembang menjadi bentuk kronis. Kadang-kadang dengan keracunan yang parah (misalnya, alkohol), bentuk kronis terjadi secara mandiri. Dalam bentuk hepatitis kronis, proses penggantian sel hati dengan jaringan ikat terjadi. Ini diekspresikan dengan lemah, lambat, dan oleh karena itu kadang-kadang tetap tidak terdiagnosis sampai timbulnya sirosis hati. Hepatitis kronis diperlakukan lebih buruk, dan prognosis untuk penyembuhannya kurang menguntungkan. Dalam perjalanan penyakit akut, keadaan kesehatan secara signifikan memburuk, penyakit kuning berkembang, keracunan muncul, fungsi fungsional hati menurun, dan peningkatan kadar bilirubin dalam darah. Dengan deteksi tepat waktu dan pengobatan hepatitis akut yang efektif, pasien paling sering pulih. Dengan durasi penyakit lebih dari enam bulan, hepatitis menjadi kronis. Bentuk kronis dari penyakit ini menyebabkan gangguan serius dalam tubuh - limpa dan hati membesar, metabolisme terganggu, komplikasi seperti sirosis hati dan formasi onkologi terjadi. Jika seorang pasien telah menurunkan kekebalan, rejimen pengobatan tidak benar atau ada ketergantungan alkohol, maka transisi ke bentuk hepatitis kronis mengancam kehidupan pasien.

Varietas Hepatitis

Hepatitis memiliki beberapa jenis: A, B, C, D, E, F, G, mereka juga disebut virus hepatitis, sebagai penyebab terjadinya mereka adalah virus.

Jenis hepatitis ini juga disebut penyakit Botkin. Ini memiliki masa inkubasi yang berlangsung dari 7 hari hingga 2 bulan. Patogennya, virus RNA, dapat ditularkan dari orang yang sakit ke orang yang sehat dengan menggunakan produk dan air berkualitas rendah, kontak dengan barang-barang rumah tangga yang digunakan oleh pasien. Hepatitis A mungkin dalam tiga bentuk, mereka dibagi sesuai dengan kekuatan manifestasi penyakit:

  • dalam bentuk akut dengan ikterus, hati rusak parah,
  • dengan subakut tanpa ikterus, kita dapat berbicara tentang versi ringan dari penyakit ini,
  • dalam bentuk subklinis, seseorang bahkan mungkin tidak menyadari gejalanya, meskipun orang yang terinfeksi adalah sumber virus dan mampu menginfeksi orang lain.

Penyakit ini juga disebut serum hepatitis. Ditemani oleh peningkatan hati dan limpa, munculnya rasa nyeri di persendian, muntah, suhu, kerusakan pada hati. Ini terjadi baik dalam bentuk akut atau kronis, yang ditentukan oleh keadaan kekebalan pasien. Cara infeksi: selama suntikan dengan pelanggaran aturan sanitasi, hubungan seksual, selama transfusi darah, penggunaan alat medis yang tidak didesinfeksi dengan baik. Durasi periode inkubasi adalah 50 ÷ 180 hari. Insiden hepatitis B dikurangi dengan menggunakan vaksinasi.

Jenis penyakit ini adalah salah satu penyakit yang paling serius, karena sering disertai dengan sirosis atau kanker hati, yang kemudian menyebabkan kematian. Penyakit ini tidak dapat diobati dengan baik, dan terlebih lagi, setelah menderita hepatitis C sekali, seseorang dapat terinfeksi kembali dengan penyakit yang sama. Tidak mudah untuk menyembuhkan HCV: setelah penyakit hepatitis C akut, 20% pasien sembuh, dan pada 70% pasien tubuh tidak dapat menyembuhkan dirinya sendiri dari virus, dan penyakit menjadi kronis. Untuk menetapkan alasan yang beberapa orang sembuh sendiri, sementara yang lain tidak, belum berhasil. Bentuk kronis hepatitis C sendiri tidak akan hilang, dan karenanya perlu diobati. Diagnosis dan pengobatan bentuk akut HCV dilakukan oleh spesialis penyakit menular, bentuk kronis dari penyakit ini adalah ahli hepatologi atau gastroenterologist. Adalah mungkin untuk terinfeksi selama transfusi plasma atau darah dari donor yang terinfeksi, ketika menggunakan peralatan medis yang berkualitas buruk, secara seksual, dan ibu yang sakit mentransmisikan infeksi ke anak. Virus hepatitis C (HCV) dengan cepat menyebar ke seluruh dunia, jumlah pasien telah lama melebihi satu setengah juta orang. Sebelumnya, HCV tidak merespon terapi dengan baik, tetapi sekarang penyakit ini dapat disembuhkan menggunakan antivirus yang bertindak langsung dan modern. Hanya terapi ini yang cukup mahal, dan karenanya tidak semua orang mampu membelinya.

Jenis hepatitis D hanya mungkin ketika koinfeksi dengan virus hepatitis B (koinfeksi adalah kasus infeksi sel tunggal dengan virus dari berbagai jenis). Dia ditemani oleh luka hati besar dan penyakit akut. Cara-cara infeksi - memasukkan virus penyakit ke dalam darah orang yang sehat dari pembawa virus atau orang yang sakit. Masa inkubasi berlangsung 20 ÷ 50 hari. Dari luar, perjalanan penyakit ini menyerupai hepatitis B, tetapi bentuknya lebih parah. Mungkin menjadi kronis dengan pergi nanti ke sirosis. Adalah mungkin untuk melakukan vaksinasi, serupa dengan yang digunakan untuk hepatitis B.

Sedikit mengingatkan pada hepatitis A oleh jalan dan mekanisme penularan, karena itu juga ditularkan melalui darah dengan cara yang sama. Ciri-cirinya adalah terjadinya bentuk kilat-cepat, menyebabkan kematian dalam jangka waktu tidak melebihi 10 hari. Dalam kasus lain, itu dapat secara efektif disembuhkan, dan prognosis untuk pemulihan sering menguntungkan. Pengecualian dapat berupa kehamilan, karena risiko kehilangan anak mendekati 100%.

Jenis hepatitis ini belum cukup dipelajari. Hanya diketahui bahwa penyakit ini disebabkan oleh dua virus yang berbeda: satu diisolasi dari darah donor, yang kedua ditemukan di feses pasien yang menerima hepatitis setelah transfusi darah. Tanda: munculnya penyakit kuning, demam, asites (penumpukan cairan di rongga perut), peningkatan ukuran hati dan limpa, peningkatan kadar bilirubin dan enzim hati, munculnya perubahan pada urin dan feses, serta keracunan umum pada tubuh. Metode pengobatan hepatitis F yang efektif belum dikembangkan.

Jenis hepatitis ini mirip dengan hepatitis C, tetapi tidak berbahaya karena tidak berkontribusi terhadap perkembangan sirosis dan kanker hati. Sirosis dapat terjadi hanya dalam kasus koinfeksi hepatitis G dan C.

Diagnostik

Dalam gejala mereka, hepatitis virus mirip satu sama lain, sama seperti beberapa infeksi virus lainnya. Untuk alasan ini, sulit untuk menetapkan diagnosis pasti pasien. Dengan demikian, untuk memperjelas jenis hepatitis dan resep terapi yang benar, tes darah laboratorium diperlukan untuk mengidentifikasi penanda - indikator yang bersifat individual untuk setiap jenis virus. Setelah mengidentifikasi keberadaan penanda dan rasio tersebut, adalah mungkin untuk menentukan tahap penyakit, aktivitasnya dan kemungkinan hasilnya. Untuk melacak dinamika proses, setelah jangka waktu pemeriksaan berulang.

Cara mengobati hepatitis C

Rejimen pengobatan saat ini untuk bentuk kronis HCV direduksi menjadi terapi antiviral kombinasi, termasuk antivirus yang bertindak langsung seperti sofosbuvir, velpatasvir, daclatasvir, dan ledipasvir dalam berbagai kombinasi. Kadang-kadang, ribavirin dan interferon ditambahkan untuk meningkatkan efektivitasnya. Kombinasi zat aktif ini menghentikan replikasi virus, menyelamatkan hati dari efek merusaknya. Terapi ini memiliki beberapa kelemahan:

  1. Biaya obat untuk memerangi virus hepatitis B tinggi, tidak semua orang bisa mendapatkannya.
  2. Penerimaan obat perorangan disertai dengan efek samping yang tidak menyenangkan, termasuk demam, mual, diare.

Lamanya pengobatan hepatitis kronis terjadi dari beberapa bulan hingga satu tahun, tergantung pada genotipe virus, tingkat kerusakan pada tubuh dan obat-obatan yang digunakan. Karena hepatitis C terutama mempengaruhi hati, pasien diminta untuk mengikuti diet ketat.

Karakteristik genotipe HCV

Hepatitis C adalah salah satu hepatitis virus paling berbahaya. Penyakit ini disebabkan oleh virus yang mengandung RNA, yang disebut Flaviviridae. Virus hepatitis C juga disebut "pembunuh kasih sayang." Dia menerima julukan yang tidak menarik karena fakta bahwa pada tahap awal penyakit ini tidak disertai dengan gejala sama sekali. Tidak ada tanda-tanda ikterus klasik, dan tidak ada rasa sakit di daerah hipokondrium kanan. Deteksi keberadaan virus tidak bisa lebih awal dari beberapa bulan setelah infeksi. Dan sebelum itu, reaksi sistem kekebalan benar-benar tidak ada dan tidak mungkin untuk mendeteksi penanda dalam darah, dan oleh karena itu tidak mungkin untuk melakukan genotip. Ciri khas HCV juga adalah fakta bahwa setelah memasuki aliran darah selama proses reproduksi, virus mulai bermutasi dengan cepat. Mutasi seperti itu mengganggu sistem kekebalan tubuh yang terinfeksi untuk beradaptasi dan melawan penyakit. Akibatnya, penyakit ini dapat berlangsung selama beberapa tahun tanpa gejala, setelah itu sirosis atau tumor ganas muncul hampir tanpa irisan. Dan pada 85% kasus, penyakit dari bentuk akut menjadi kronis. Virus hepatitis C memiliki fitur penting - berbagai struktur genetik. Faktanya, hepatitis C adalah kumpulan virus, diklasifikasikan menurut varian struktur mereka dan dibagi lagi menjadi genotipe dan subtipe. Genotipe adalah jumlah gen yang mengkode sifat-sifat yang diturunkan. Sejauh ini, obat-obatan tahu 11 genotipe virus hepatitis C, yang memiliki subtipe sendiri. Genotipe ditetapkan oleh angka dari 1 hingga 11 (meskipun dalam studi klinis genotipe terutama digunakan 1 ÷ 6), dan subtipe, menggunakan huruf-huruf alfabet Latin:

Di berbagai negara, genotipe HCV tersebar dengan cara yang berbeda, misalnya, di Rusia, yang paling sering ditemukan dari awal hingga ketiga. Tingkat keparahan penyakit tergantung pada jenis genotipe, mereka menentukan rejimen pengobatan, durasi dan hasil pengobatan.

Bagaimana strain HCV tersebar di seluruh planet ini

Di wilayah dunia, genotipe hepatitis C didistribusikan secara heterogen, dan paling sering genotipe 1, 2, 3 dapat ditemukan, dan untuk wilayah individu terlihat seperti ini:

  • Di Eropa Barat dan wilayah timurnya, genotipe 1 dan 2 adalah yang paling umum,
  • di AS, subtipe 1a dan 1b,
  • Di Afrika utara, genotipe 4 adalah yang paling umum.

Pada risiko kemungkinan infeksi HCV adalah orang dengan kelainan darah (tumor dari sistem hematopoietik, hemofilia, dll.), Serta pasien yang menjalani perawatan di unit dialisis. Genotipe 1 dianggap yang paling umum di dunia, itu bertanggung jawab

50% dari total jumlah kasus. Yang paling umum kedua adalah genotipe 3 dengan sedikit di atas 30%. Penyebaran HCV di seluruh Rusia memiliki perbedaan signifikan dari dunia atau versi Eropa:

  • Akun genotipe 1b untuk

50% dari kasus

  • pada genotipe 3a

    20%

  • hepatitis 1a terinfeksi

    10% pasien

  • hepatitis dengan genotipe 2 ditemukan di

    Tetapi tidak hanya kesulitan terapi HCV tergantung pada genotipe. Faktor-faktor berikut juga mempengaruhi efektivitas pengobatan:

    • usia pasien. Kesempatan penyembuhan jauh lebih tinggi untuk anak muda
    • wanita lebih mudah pulih daripada pria
    • tingkat kerusakan hati adalah penting - hasil yang menguntungkan lebih tinggi dengan lebih sedikit kerusakan,
    • besarnya viral load - semakin kecil virus dalam tubuh pada saat pengobatan, semakin efektif terapi,
    • Berat badan pasien: semakin tinggi, semakin rumit perawatannya.

    Oleh karena itu, rejimen pengobatan dipilih oleh dokter yang hadir, berdasarkan faktor-faktor yang tercantum di atas, genotyping dan rekomendasi dari EASL (Asosiasi Eropa untuk Penyakit Hati). EASL terus-menerus membuat rekomendasi yang up to date dan, sebagai obat baru yang efektif untuk pengobatan hepatitis C muncul, perbaiki rejimen yang direkomendasikan.

    Siapa yang berisiko terinfeksi HCV?

    Seperti diketahui, virus hepatitis C ditularkan melalui aliran darah, dan karena itu kemungkinan besar terinfeksi:

    • pasien yang ditransfusi
    • pasien dan klien di kantor gigi dan institusi medis di mana alat medis tidak disterilkan dengan benar,
    • karena instrumen yang tidak steril, mungkin berbahaya untuk mengunjungi salon kuku dan kecantikan,
    • Pecinta penindik dan tato juga bisa menderita karena instrumen yang tidak dirawat dengan baik,
    • ada risiko tinggi infeksi bagi mereka yang menggunakan narkoba karena penggunaan berulang jarum yang tidak steril,
    • janin dapat terinfeksi oleh ibu yang terinfeksi hepatitis C,
    • selama hubungan seksual, infeksi juga bisa masuk ke tubuh orang yang sehat.

    Apa pengobatan hepatitis C?

    Virus hepatitis C dianggap sebagai virus pembunuh “lunak” karena suatu alasan. Ia mampu tidak menunjukkan dirinya selama bertahun-tahun, setelah itu tiba-tiba muncul dalam bentuk komplikasi disertai dengan sirosis atau kanker hati. Lagi pula, lebih dari 177 juta orang di dunia telah mendiagnosis HCV. Perawatan yang digunakan hingga 2013, gabungan suntikan inetferferon dan ribavirin, memberi pasien kesempatan untuk penyembuhan, tidak melebihi 40-50%. Dan selain itu, itu disertai dengan efek samping yang serius dan menyakitkan. Situasi berubah pada musim panas 2013 setelah perusahaan farmasi AS Gilead Sciences mempatenkan substansi sofosbuvir, yang diproduksi sebagai obat dengan nama merek Sovaldi, yang termasuk 400 mg obat. Ini telah menjadi obat antivirus langsung pertama (DAA) untuk memerangi HCV. Hasil uji klinis dokter yang senang dengan sofosbuvir dengan kinerjanya, yang mencapai 85 ÷ 95% tergantung pada genotipe, sementara durasi terapi dibandingkan dengan pengobatan dengan interferon dan ribavirin lebih dari dua kali lipat. Dan, meskipun perusahaan farmasi Gilead mematenkan sofosbuvir, itu disintesis pada 2007 oleh Michael Sofia, seorang karyawan Pharmasett, yang kemudian diakuisisi oleh Gilead Sciences. Dari nama Michael, zat yang disintesis olehnya disebut sofosbuvir. Michael Sophia sendiri, bersama dengan sekelompok ilmuwan yang membuat sejumlah penemuan yang mengungkapkan sifat HCV, yang memungkinkan dia untuk membuat obat yang efektif untuk pengobatannya, menerima hadiah Lasker-DeBakey untuk penelitian medis klinis. Nah, hampir semua keuntungan dari penjualan produk baru yang efektif pergi ke Gilead, yang menetapkan harga tinggi secara monopoli pada Sovaldi. Selain itu, perusahaan membela pengembangannya dengan paten khusus, yang mana Gilead dan beberapa perusahaan mitranya menjadi pemilik hak eksklusif untuk memproduksi DAA asli. Akibatnya, keuntungan Gilead dalam dua tahun pertama penjualan obat itu berulang kali menutupi semua biaya yang dikeluarkan perusahaan dalam membeli Pharmasett, memperoleh paten dan uji klinis berikutnya.

    Apa itu sofosbuvir?

    Efektivitas obat ini dalam memerangi HCV sangat tinggi sehingga hampir tidak ada rejimen pengobatan yang dapat dilakukan tanpa penggunaannya. Sofosbuvir tidak direkomendasikan untuk digunakan sebagai monoterapi, tetapi ketika digunakan dalam kombinasi, itu menunjukkan hasil yang sangat baik. Awalnya, obat itu digunakan dalam kombinasi dengan ribavirin dan interferon, yang memungkinkan dalam kasus yang tidak rumit untuk mencapai penyembuhan hanya dalam 29 minggu. Dan ini terlepas dari fakta bahwa hanya terapi interferon dan ribavirin yang dua kali kurang efektif, dan durasinya kadang melebihi 40 minggu. Setelah 2013, setiap tahun berikutnya membawa berita tentang munculnya semakin banyak obat baru yang berhasil memerangi virus hepatitis C:

    • Pada tahun 2014, Daclatasvir muncul
    • 2015 adalah tahun kelahiran Ledipasvir,
    • 2016 senang dengan pembuatan velpatasvir.

    Daclatasvir dilepaskan oleh Bristol-Myers Squibb dalam bentuk obat Daklinza, mengandung 60 mg bahan aktif. Dua zat berikut ini diciptakan oleh para ilmuwan Gilead, dan karena tidak ada satupun yang cocok untuk monoterapi, mereka menggunakan obat hanya dengan kombinasi sofosbuvir. Untuk memfasilitasi terapi, obat-obatan yang dibuat kembali dengan hati-hati dirilis segera dalam kombinasi dengan sofosbuvir. Jadi ada obat-obatan:

    • Harvoni, menggabungkan sofosbuvir 400 mg dan ledipasvir 90 mg,
    • Epclusa, yang termasuk sofosbuvir 400 mg dan velpatasvir 100 mg.

    Dalam pengobatan dengan daclatasvir, dua obat yang berbeda, Sovaldi dan Daclins, diambil. Masing-masing kombinasi bahan aktif yang dipasangkan digunakan untuk mengobati genotipe HCV tertentu sesuai dengan rejimen pengobatan yang direkomendasikan oleh EASL. Dan hanya kombinasi sofosbuvir dengan velpatasvir yang menjadi pangenotypic (universal). Epclus menyembuhkan semua genotipe hepatitis C dengan efisiensi tinggi hampir 97 ÷ 100%.

    Munculnya generik

    Uji klinis menegaskan keefektifan pengobatan, tetapi semua obat yang sangat efektif ini memiliki satu kelemahan utama - harga terlalu tinggi, yang tidak memungkinkan mereka untuk mendapatkan sebagian besar yang sakit. Harga monopolistik yang tinggi untuk produk yang dipasang oleh Gilead menyebabkan kemarahan dan skandal, memaksa pemegang paten untuk membuat konsesi tertentu, memberikan beberapa perusahaan dari India, Mesir dan Pakistan lisensi untuk memproduksi analog (generik) dari obat yang efektif dan dicari. Selain itu, perang melawan pemegang hak paten, menawarkan obat-obatan untuk pengobatan dengan harga yang tidak tertandingi, menyebabkan India, sebagai negara di mana jutaan pasien dengan hepatitis C hidup dalam bentuk kronis. Sebagai hasil dari perjuangan ini, Gilead mengeluarkan lisensi dan pengembangan paten ke 11 perusahaan India untuk rilis independen sofosbuvir pertama, dan kemudian produk baru mereka yang lain. Setelah mendapatkan lisensi, pabrikan India segera mulai memproduksi obat generik, menugaskan nama merek mereka sendiri untuk memproduksi obat-obatan. Ini adalah bagaimana pertama Sovaldi generik muncul, lalu Daklinza, Harvoni, Epclusa, dan India menjadi pemimpin dunia dalam produksi mereka. Menurut perjanjian lisensi, produsen India membayar 7% dari pendapatan mereka demi pemegang paten. Tetapi bahkan dengan pembayaran ini, biaya obat generik yang diproduksi di India adalah sepuluh kali lebih sedikit daripada yang asli.

    Mekanisme aksi

    Seperti yang dilaporkan sebelumnya, rejimen pengobatan HCV yang muncul terkait dengan DAA dan bertindak langsung terhadap virus. Sementara sebelumnya digunakan untuk pengobatan interferon dengan ribavirin memperkuat sistem kekebalan tubuh manusia, membantu tubuh untuk melawan penyakit. Setiap zat bertindak pada virus dengan caranya sendiri:

    1. Sofosbuvir menghalangi RNA polimerase, sehingga menghambat replikasi virus.
    1. Daclatasvir, ledipasvir dan velpatasvir adalah inhibitor NS5A yang mencegah penyebaran virus dan penetrasi mereka ke dalam sel yang sehat.

    Efek terarah seperti itu memungkinkan Anda untuk berhasil melawan HCV, menggunakan sofosbuvir dalam kombinasi dengan daklatasvir, ledipasvir, velpatasvir untuk terapi. Kadang-kadang, untuk meningkatkan efek pada virus, komponen ketiga ditambahkan ke pasangan, paling sering ribavirin.

    Produsen generik dari india

    Perusahaan farmasi di negara itu telah mengambil keuntungan dari lisensi yang diberikan kepada mereka, dan sekarang India merilis obat generik Sovaldi berikut:

    • Hepcvir - produsen Cipla Ltd.,
    • Hepcinat - Natco Pharma Ltd.,
    • Cimivir - Biocon ltd. # 038, Hetero Drugs Ltd.,
    • MyHep adalah produsen Mylan Pharmaceuticals Private Ltd.,
    • SoviHep - Zydus Heptiza Ltd.,
    • Sofovir adalah produsen Hetero Drugs Ltd.,
    • Resof - diproduksi oleh Dr Reddy # 8217, s Laboratories,
    • Virso - rilis Strides Arcolab.

    Analis Daklins juga diproduksi di India:

    • Natdac oleh Natco Pharma,
    • Dacihep dari Zydus Heptiza,
    • Daclahep dari Hetero Narkoba,
    • Dactovin dari Strides Arcolab,
    • Daclawin dari Biocon ltd. # 038, Hetero Drugs Ltd.,
    • Mydacla dari Mylan Pharmaceuticals.

    Setelah Gilead, pembuat obat India juga menguasai produksi Harvoni, yang menghasilkan obat generik berikut:

    • Ledifos - Hetero Rilis
    • Hepcinat LP - Natco,
    • Myhep LVIR - Mylan,
    • Hepcvir L - Cipla Ltd.,
    • Cimivir L - Biocon ltd. # 038, Hetero Drugs Ltd.,
    • LediHep - Zydus.

    Dan pada tahun 2017, produksi obat generik India berikut Epclusi dikuasai:

    • Velpanat telah merilis Natco Pharma,
    • Velasof telah menguasai Hetero Drugs,
    • SoviHep V mulai memproduksi perusahaan Zydus Heptiza.

    Seperti yang Anda lihat, perusahaan farmasi India tidak tertinggal di belakang pabrikan Amerika, cukup cepat menguasai obat yang baru dikembangkan, sambil menghormati semua karakteristik kualitatif, kuantitatif dan terapeutik. Ketahanan termasuk bioekivalensi farmakokinetik dalam kaitannya dengan yang asli.

    Persyaratan umum

    Obat generik adalah obat yang mampu menggantikan pengobatan dengan obat-obatan asli yang mahal dengan paten dalam hal sifat farmakologi dasarnya. Mereka dapat dirilis baik ketika mereka tersedia dan ketika tidak ada lisensi, hanya kehadirannya membuat analog yang dikeluarkan berlisensi. Dalam kasus pemberian lisensi kepada perusahaan farmasi India, Gilead juga memberi mereka teknologi produksi, memberi pemegang lisensi hak untuk kebijakan harga independen. Agar analog obat yang dianggap generik, harus mematuhi sejumlah parameter:

    1. Anda harus mematuhi rasio komponen farmasi yang paling penting dalam persiapan kualitatif serta standar kuantitatif.
    1. Ikuti standar internasional yang relevan.
    1. Kepatuhan wajib dengan ketentuan produksi yang tepat diperlukan.
    1. Dalam persiapan, ekuivalen yang tepat dari parameter absorpsi harus dipertahankan.

    Perlu dicatat bahwa WHO waspada untuk memastikan ketersediaan obat-obatan, yang berusaha menggantikan obat bermerek mahal dengan bantuan anggaran generik.

    Soferbuvir Generics Mesir

    Tidak seperti India, perusahaan farmasi Mesir tidak menjadi pemimpin dunia dalam produksi obat generik hepatitis C, meskipun mereka juga menguasai produksi sofosbuvir analog. Namun, sebagian besar analognya tidak berlisensi:

    • MPI Viropack, memproduksi obat Marcyrl Pharmaceutical Industries # 8229, salah satu obat generik Mesir yang pertama,
    • Heterosofir, dirilis oleh Pharmed Healthcare. Ini adalah satu-satunya generik berlisensi di Mesir. Pada paket, di bawah hologram, kode disembunyikan, memungkinkan untuk memeriksa keaslian persiapan di situs web produsen, dengan demikian tidak termasuk pemalsuan,
    • Grateziano, diproduksi oleh Pharco Pharmaceuticals,
    • Sofolanork, diproduksi oleh Vimeo,
    • Sofocivir, diproduksi oleh ZetaPhar.

    Obat generik untuk melawan hepatitis dari Bangladesh

    Bangladesh adalah negara lain yang memproduksi obat generik melawan HCV dalam volume besar. Selain itu, negara ini bahkan tidak memerlukan lisensi untuk produksi analog obat bermerek, karena pada tahun 2030 perusahaan-perusahaan farmasi diperbolehkan untuk mengeluarkan persiapan medis seperti itu tanpa kehadiran dokumen perizinan yang sesuai. Yang paling terkenal dan dilengkapi dengan teknologi terbaru adalah perusahaan farmasi Beacon Pharmaceuticals Ltd. Proyek kapasitas produksinya dibuat oleh para ahli Eropa dan sesuai dengan standar internasional. Beacon melepaskan obat generik berikut untuk mengobati virus hepatitis C:

    • Soforal - sofosbuvir generik, mengandung zat aktif 400 mg. Tidak seperti kemasan tradisional dalam botol 28 buah, Sophoral diproduksi dalam bentuk lecet 8 tablet dalam satu piring,
    • Daclavir adalah generik dari Daclatasvir, satu tablet obat mengandung 60 mg zat aktif. Ini juga diproduksi dalam bentuk lecet, tetapi setiap disk berisi 10 tablet,
    • Sofosvel - generik Epclusa, terdiri sofosbuvir velpatasvir 400 mg dan 100 mg. Pangenotipny (multi) obat yang efektif dalam pengobatan genotipe HCV 1 ÷ 6. Dalam hal ini, tidak ada kemasan biasa ke dalam botol, tablet yang dikemas dalam blister dari 6 buah di piring masing-masing.
    • Darvoni adalah obat kompleks yang menggabungkan sofosbuvir 400 mg dan daclatasvir 60 mg. Jika perlu, gabungkan terapi sofosbuvir dengan daklatasvir, gunakan obat dari produsen lain, Anda harus mengambil pil dari masing-masing jenis. Dan Beacon menyatukan mereka dalam satu pil. Darvoni dikemas dalam blister 6 tablet dalam satu piring, dikirim hanya untuk ekspor.

    Ketika membeli persiapan dari Beacon berdasarkan kursus terapi, orang harus mempertimbangkan keaslian kemasan mereka untuk membeli jumlah yang diperlukan untuk perawatan. Perusahaan-perusahaan farmasi India yang paling terkenal Seperti disebutkan di atas, setelah perusahaan-perusahaan farmasi di negara itu menerima lisensi untuk melepaskan obat-obatan generik untuk HCV, India menjadi pemimpin dunia dalam produksi mereka. Tetapi di antara banyak perusahaan, ada baiknya mencatat beberapa, yang produknya di Rusia adalah yang paling terkenal.

    Natco Pharma Ltd.

    Perusahaan farmasi paling populer Natco Pharma Ltd., obat yang menyelamatkan nyawa puluhan ribu kasus bentuk kronis hepatitis C. Hal ini telah menguasai produksi hampir seluruh garis obat antivirus tindakan langsung, termasuk sofosbuvir dengan daklatasvirom dan ledipasvir dengan velpatasvirom. Natco Pharma telah muncul pada tahun 1981 di kota Hyderabad dengan modal awal 3,3 juta. Rupee, sedangkan jumlah karyawan sebesar 20 orang. Sekarang di India dalam lima perusahaan yang beroperasi Natco 3500. Man, tetapi ada juga cabang di negara-negara lain. Selain unit produksi, perusahaan memiliki laboratorium yang dilengkapi dengan baik yang memungkinkannya mengembangkan persiapan medis modern. Di antara perkembangannya sendiri, perlu dicatat obat-obatan untuk melawan kanker. Salah satu obat yang paling terkenal di bidang ini dianggap Veenat, diproduksi sejak tahun 2003 dan digunakan untuk leukemia. Ya, dan pelepasan obat generik untuk pengobatan virus hepatitis C adalah prioritas untuk Natco.

    Hetero Drugs Ltd.

    Perusahaan ini telah menetapkan sebagai tujuannya produksi obat generik, mensubordinasi aspirasi ini ke jaringan industrinya sendiri, termasuk pabrik dengan cabang dan kantor dengan laboratorium. Jaringan produksi Hetero diasah untuk memproduksi obat-obatan di bawah lisensi yang diperoleh perusahaan. Salah satu kegiatannya adalah persiapan medis yang memungkinkan untuk melawan penyakit virus yang serius, pengobatan yang menjadi tidak mungkin bagi banyak pasien karena tingginya biaya obat-obatan asli. Lisensi yang diperoleh memungkinkan Hetero untuk segera melanjutkan ke rilis generik, yang kemudian dijual dengan harga yang terjangkau untuk pasien. Penciptaan Obat-Obatan Hetero berasal dari tahun 1993. Selama 24 tahun terakhir, selusin pabrik dan beberapa lusin unit produksi telah muncul di India. Kehadiran laboratorium sendiri memungkinkan perusahaan untuk melakukan pekerjaan eksperimental pada sintesis zat, yang berkontribusi pada perluasan basis produksi dan ekspor aktif obat ke negara-negara asing.

    Zydus heptiza

    Zydus adalah perusahaan India yang telah menetapkan tujuan untuk membangun masyarakat yang sehat, yang menurut pemiliknya, akan diikuti oleh perubahan untuk menjadi lebih baik dalam kualitas hidup masyarakat. Tujuannya adalah mulia, dan oleh karena itu, untuk mencapainya, perusahaan melakukan kegiatan pendidikan aktif yang mempengaruhi segmen penduduk termiskin. Termasuk dengan vaksinasi gratis dari populasi terhadap hepatitis B. Zidus dalam hal volume produksi di pasar farmasi India berada di tempat keempat. Selain itu, 16 dari obat-obatannya ada dalam daftar 300 obat-obatan paling penting dari industri farmasi India. Produk Zydus diminati tidak hanya di pasar domestik, mereka dapat ditemukan di apotek di 43 negara di planet kita. Dan kisaran obat yang diproduksi di 7 perusahaan melebihi 850 obat. Salah satu industri yang paling kuat adalah di negara bagian Gujarat dan merupakan salah satu yang terbesar tidak hanya di India, tetapi juga di Asia.

    Terapi HCV 2017

    Regimen pengobatan hepatitis C untuk setiap pasien dipilih secara individual oleh dokter. Untuk pemilihan skema yang tepat, efektif dan aman, dokter perlu mengetahui:

    • genotipe virus
    • durasi penyakit,
    • tingkat kerusakan hati,
    • ada / tidaknya sirosis, infeksi bersamaan (misalnya, HIV atau hepatitis lainnya), pengalaman negatif dari pengobatan sebelumnya.

    Setelah menerima data ini setelah siklus analisis, dokter memilih opsi perawatan yang optimal berdasarkan rekomendasi dari EASL. Rekomendasi EASL disesuaikan dari tahun ke tahun, mereka menambahkan obat yang baru muncul. Sebelum merekomendasikan opsi pengobatan baru, mereka disajikan untuk dipertimbangkan oleh Kongres atau pertemuan khusus. Pada 2017, pertemuan khusus EASL meninjau pembaruan untuk skema yang direkomendasikan di Paris. Diputuskan untuk sepenuhnya menghentikan terapi interferon di Eropa untuk mengobati HCV. Selain itu, tidak ada satu pun rejimen yang direkomendasikan menggunakan obat tunggal yang langsung bertindak. Berikut ini beberapa opsi perawatan yang disarankan. Semuanya diberikan semata-mata untuk sosialisasi dan tidak dapat menjadi panduan untuk bertindak, karena hanya dokter yang dapat memberikan resep untuk terapi, di bawah pengawasan yang nantinya akan ia jalani.

    1. Rejimen pengobatan yang mungkin diajukan oleh EASL dalam kasus monoinfeksi hepatitis C atau koinfeksi dengan HIV + HCV pada pasien tanpa sirosis dan sebelumnya tidak diobati:
    • untuk pengobatan genotipe 1a dan 1b, Anda dapat menggunakan:

    # 8229, sofosbuvir + ledipasvir, tanpa ribavirin, durasi 29 minggu, # 8229, sofosbuvir + daclatasvir, juga tanpa ribavirin, masa pengobatan 29 minggu, # 8229, atau sofosbuvir + velpatasvir tanpa ribavirin, durasi kursus adalah 29 minggu.

    • dalam pengobatan genotipe 2 digunakan tanpa ribavirin selama 29 minggu:

    # 8229, sofosbuvir + dklatasvir, # 8229, atau sofosbuvir + velpatasvir.

    • dalam pengobatan genotipe 3 tanpa penggunaan ribavirin dengan masa pengobatan 29 minggu, gunakan:

    # 8229, sofosbuvir + daclatasvir, # 8229, atau sofosbuvir + velpatasvir.

    • selama pengobatan genotipe 4, adalah mungkin untuk menerapkan ribothirin dalam 29 minggu:

    # 8229, sofosbuvir + ledipasvir, # 8229, sofosbuvir + daclatasvir, # 8229, atau sofosbuvir + velpatasvir.

    1. Rekomendasi rejimen pengobatan EASL untuk monoinfeksi hepatitis C atau infeksi HIV / HCV bersamaan pada pasien dengan sirosis kompensasi yang sebelumnya tidak diobati:
    • untuk pengobatan genotipe 1a dan 1b, Anda dapat menggunakan:

    # 8229, sofosbuvir + ledipasvir dengan ribavirin, durasi 29 minggu, # 8229, atau 24 minggu tanpa ribavirin, # 8229, dan pilihan lain - 24 minggu dengan ribavirin dengan prognosis respon yang tidak baik, # 8229, sofosbuvir + daclatasvir, jika tanpa ribavirin, kemudian 24 minggu, dan dengan ribavirin, masa pengobatan adalah 29 minggu, # 8229, atau sofosbuvir + velpatasvir tanpa ribavirin, 29 minggu.

    # 8229, sofosbuvir + dklatasvir tanpa ribavirin, durasinya 29 minggu, dan dengan ribavirin dengan prognosis yang tidak menguntungkan - 24 minggu, # 8229, atau sofosbuvir + velpatasvir tanpa kombinasi dengan ribavirin selama 29 minggu.

    # 8229, sofosbuvir + daclatasvir selama 24 minggu dengan ribavirin, # 8229, atau sofosbuvir + velpatasvir lagi dengan ribavirin, masa pengobatan adalah 29 minggu, # 8229, sebagai pilihan sofosbuvir + velpatasvir mungkin 24 minggu, tetapi tanpa ribavirin.

    • Dalam pengobatan genotipe 4, rejimen yang sama digunakan seperti pada genotipe 1a dan 1b.

    Seperti yang Anda lihat, selain kondisi pasien dan karakteristik tubuhnya, kombinasi obat yang diresepkan yang dipilih oleh dokter juga mempengaruhi hasil terapi. Selain itu, durasi pengobatan tergantung pada kombinasi yang dipilih oleh dokter.

    Perawatan dengan obat HCV modern

    Minum pil obat langsung tindakan antivirus yang diresepkan oleh dokter secara lisan sekali sehari. Mereka tidak dibagi menjadi beberapa bagian, tidak dikunyah, tetapi dicuci dengan air biasa. Yang terbaik adalah melakukan ini pada saat yang sama, karena konsentrasi zat aktif yang konstan dalam tubuh dipertahankan. Tidak perlu melekat pada tanggal asupan makanan, hal utama adalah tidak melakukannya dengan perut kosong. Ketika Anda mulai minum obat, perhatikan kesehatan Anda, karena selama periode ini, paling mudah untuk memperhatikan kemungkinan efek samping. The PPPP sendiri tidak memiliki banyak dari mereka, sedangkan obat yang diresepkan di kompleks jauh lebih kecil. Paling sering, efek samping muncul sebagai:

    • sakit kepala
    • muntah dan pusing,
    • kelemahan umum
    • kehilangan nafsu makan
    • nyeri sendi,
    • perubahan parameter bio-kimia darah, dinyatakan dalam kadar hemoglobin rendah, penurunan trombosit dan limfosit.

    Efek samping mungkin terjadi pada sejumlah kecil pasien. Tetapi semua hal yang sama tentang semua penyakit yang diperhatikan harus diberitahukan kepada dokter yang merawat untuk mengambil tindakan yang diperlukan. Untuk menghindari peningkatan efek samping, alkohol dan nikotin harus dikeluarkan dari penggunaan, karena mereka mempengaruhi hati.

    Kontraindikasi

    Dalam beberapa kasus, penerimaan DAA dikecualikan, hal ini menyangkut:

    • hipersensitivitas individu pasien terhadap bahan obat tertentu,
    • pasien di bawah usia 18 tahun, karena tidak ada data akurat tentang efeknya pada tubuh,
    • wanita yang membawa janin dan bayi yang menyusui,
    • perempuan harus menggunakan metode kontrasepsi yang dapat diandalkan untuk menghindari konsepsi selama periode terapi. Selain itu, persyaratan ini juga berlaku untuk wanita yang pasangannya juga menerima terapi DAA.

    Simpan obat antiviral dari tindakan langsung di tempat yang tidak dapat diakses untuk anak-anak dan tindakan sinar matahari langsung. Suhu penyimpanan harus dalam kisaran 15 ÷ 30ºС. Mulai minum obat, periksa tanggal pembuatan dan penyimpanan yang ditunjukkan pada paket. Obat-obatan terlarang dilarang. Bagaimana cara mendapatkan DAA bagi warga Rusia Sayangnya, obat-obatan India tidak dapat ditemukan di apotek Rusia. Perusahaan farmasi Gilead, memberikan lisensi untuk pelepasan obat-obatan, secara hati-hati melarang ekspor mereka ke banyak negara. Termasuk di semua negara Eropa. Mereka yang ingin membeli obat generik murah untuk melawan hepatitis C dapat mengambil keuntungan dari beberapa cara:

    • memesannya melalui apotek daring Rusia dan mendapatkan barang dalam beberapa jam (atau hari) tergantung pada tempat pengiriman. Dan dalam banyak kasus, bahkan prabayar tidak diperlukan,
    • memesannya melalui toko online India dengan pengiriman rumah. Di sini Anda akan memerlukan prabayar dalam mata uang asing, dan waktu tunggu akan berlangsung dari tiga minggu hingga satu bulan. Plus, kebutuhan untuk berkomunikasi dengan penjual dalam bahasa Inggris ditambahkan,
    • pergi ke India dan bawa obat sendiri. Ini juga akan memakan waktu, ditambah hambatan bahasa, ditambah kesulitan memverifikasi keaslian barang yang dibeli di apotek. Untuk semua ini, masalah ekspor-diri akan ditambahkan, membutuhkan wadah termal, ketersediaan pendapat dokter dan resep dalam bahasa Inggris, serta salinan cek.

    Tertarik untuk membeli obat-obatan, orang-orang memutuskan sendiri opsi-opsi pengiriman mana yang dapat dipilih. Tapi jangan lupa bahwa dalam kasus HCV, hasil terapi yang baik tergantung pada kecepatan onsetnya. Di sini, dalam arti harfiah, penundaan kematian seperti, dan karena itu Anda tidak boleh menunda awal prosedur.